[发明专利]用于检测J亚群禽白血病病毒的斑点杂交方法有效
| 申请号: | 201010218049.6 | 申请日: | 2010-06-27 |
| 公开(公告)号: | CN101967523A | 公开(公告)日: | 2011-02-09 |
| 发明(设计)人: | 成子强;刘功振;张利;王晓伟 | 申请(专利权)人: | 山东农业大学 |
| 主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
| 地址: | 271018 *** | 国省代码: | 山东;37 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 用于 检测 亚群禽 白血病病毒 斑点 杂交 方法 | ||
1.一种用于检测J亚群禽白血病病毒的斑点杂交方法,其特征在于:通过此较国内外各J亚群禽白血病病毒代表毒株env基因同源性,从gp37基因设计出高度保守长度约248bp目的基因片段,用以作为制备核酸探针的基序,位置在Hprs-103原型毒株基因序列第6736-6983bp之间,合成该目的基因,进行大量克隆;制备标记核酸探针,其探针的标记浓度在50-80ng/μl;运用斑点杂交的技术,取适当大小带正电尼龙膜,提取接毒细胞DNA,在尼龙膜上点样固定DNA,进行预杂交和杂交反应,反应温度范围在42-54℃,反应探针浓度在20-30ng/ml,依次在洗液I和洗液II中浸泡、冲洗液冲洗、封闭液和抗体稀释液中浸泡、冲洗液冲洗、检测缓冲液中平衡PH值,避光,显色观察。
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