[发明专利]一种醛脱氢酶基因、载体、工程菌及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及来源于酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)菌株中的醛脱氢酶基因及其重组表达载体、基因工程菌，及其在制备重组醛脱氢酶中的应用。

(二)背景技术

醛脱氢酶能催化3-羟基丙醛、丙醛和乙醛分别生成3-羟基丙酸、丙酸和乙酸，在化工领域及人体乙醛代谢中发挥着重要作用。醛脱氢酶广泛存在于植物、动物及微生物中，其微生物来源主要有酿酒酵母及大肠杆菌。醛脱氢酶是一种复合体，含有三个亚基，分子量分别为54KD、49KD和12KD。

目前不同来源的醛脱氢酶基因已经被克隆和测序，并且实现了在不同宿主中的表达。然而野生型醛脱氢酶活力较低，限制了其大规模的生产，因此，构建具有工业用途的醛脱氢酶基因工程菌意义重大。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种醛脱氢酶基因及其重组表达载体、基因工程菌，及其在制备重组醛脱氢酶中的应用。

本发明采用的技术方案是：

一种来源于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的醛脱氢酶基因，具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

该序列由如下方法获得：

利用PCR技术，在引物1(ATGTCACACCTTCCTATGACAGTGCC)、引物2(GTCCAATTTGGCACGGACCGC)的作用下，以来源于酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)菌株中的总基因组DNA为模板，克隆得到约1.5kb的醛脱氢酶的基因片段。将该片段连接到pMD18-T载体上获得克隆载体pMD18-T-aldH和转化了pMD18-T-aldH的重组大肠杆菌JM109/pMD18-T-aldH。

对重组质粒进行测序，并利用软件对测序结果进行分析，分析表明该序列含有一个长为1488bp的开发阅读框。该基因核苷酸序列为(SEQ IDNO：1)：

1      ATGTCACACC TTCCTATGAC AGTGCCTATC AAGCTGCCCA ATGGGTTGGA ATATGAGCAA

61     CCAACGGGGT TGTTCATCAA CAACAAGTTT GTTCCTTCTA AACAGAACAA GACCTTCGAA

121    GTCATTAACC CTTCCACGGA AGAAGAAATA TGTCATATTT ATGAAGGTAG AGAGGACGAT

181    GTGGAAGAGG CCGTGCAGGC CGCCGACCGT GCCTTCTCTA ATGGGTCTTG GAACGGTATC

241    GACCCTATTG ACAGGGGTAA GGCTTTGTAC AGGTTAGCCG AATTAATTGA ACAGGACAAG

301    GATGTCATTG CTTCCATCGA GACTTTGGAT AACGGTAAAG CTATCTCTTC CTCGAGAGGA

361    GATGTTGATT TAGTCATCAA CTATTTGAAA TCTTCTGCTG GCTTTGCTGA TAAAATTGAT

421    GGTAGAATGA TTGATACTGG TAGAACCCAT TTTTCTTACA CTAAGAGACA GCCTTTGGGT

481    GTTTGTGGGC AGATTATTCC TTGGAATTTC CCACTGTTGA TGTGGGCCTG GAAGATTGCC

541    CCTGCTTTGG TCACCGGTAA CACCGTCGTG TTGAGGACTG CCGAATCCAC CCCATTGTCC

601    GCTTTGTATG TGTCTAAATA CATCCCACAG GCGGGTATTC CACCTGGTGT GATCAACATT

661    GTATCCGGGT TTGGTAAGAT TGTGGGTGAG GCCATTACAA ACCATCCAAA AATCAAAAAG

721    GTTGCCTTCA CAGGGTCCAC GGCTACGGGT AGACACATTT ACCAGTCCGC AGCCGCAGGC

781    TTGAAAAAAG TGACTTTGGA GCTGGGTGGT AAATCACCAA ACATTGTCTT CGCGGACGCC