[发明专利]一种检测MLH1基因突变的方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学和医学领域。涉及人MLH1基因的突变及其用途。具体涉及人MLH1基因(MLH1gene)的突变(Mutations)及其与遗传性非息肉性结直肠癌(HNPCC)相关性的检测。

背景技术

″结直肠癌″(CRC)在肿瘤中向来有″富贵病″之称，表明其与人们的生活习惯有着密切的联系。在上海，随着生活水平的提高，结直肠癌的发病率已跃居常见恶性肿瘤的第二位，仅次于肺癌。据复旦大学附属肿瘤医院资料统计，近几年结直肠癌手术量连年攀升，2007年该院结直肠癌手术量近900例，2008年已突破千例，达到了1027例。遗传性非息肉性结直肠癌(HNPCC)，又称为林奇综合症，是一种常染色体显性遗传性疾病，约占结直肠癌的5％[Umar A，Risinger JI，Hawk ET，Barrett JC.Testing guidelines for hereditary non-polyposis colorectal cancer[J].Nat Rev Cancer 2004；4：153-8]，外显率高达80％-90％。HNPCC是由DNA错配修复基因(MMR)突变引起的，主要发生在MLH1，MSH2和MSH6，比较少的发生在PMS1和PMS2中[Peltomaki P，Vasen HF.Mutations predisposing to hereditary nonpolyposis colorectal cancer：Database and results of a collaborative study-The International Collaborative Group on Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer[J].Gastroenterology 113：1146-1158，1997]。目前，用于筛选HNPCC的方法尽管较多，但只有检测出胚系(germline)的MMR基因病理性突变才能确诊为HNPCC患者[Cai Q，Sun MH，Fu G，et al.Mutation investigation of h MLH1 and hMSH2 genes in hereditary nonpolyposis colon cancer families from China[J].J Chin Pathol，2003，32：323-328.]。

HNPCC无论是在治疗措施上还是在随访方案上均与散发性结直肠癌者不同，Syngal S等研究发现，HNPCC肿瘤对常用化疗药如5-氟尿嘧啶(5-FU)等有耐药反应[De Vos Tot NederveenCappel WH，Meulenbeld HJ，Kleibeuker JH et al.Survival after adjuvant 5-FU treatment for stage III colon cancer in hereditary nonpolyposis colorectal cancer[J].Internal J Cancer 2004：109：468-471.]。因此HNPCC患者的确诊对于选择合适的治疗方案、确定随访时间及间隔、判断预后，以及对家族成员进行二级预防等具有重要意义[Liu SR，Zhao B，Wang Z J，et al.Cl inical features and mismatch repair gene mutation screening in Chinese patients with hereditary nonpolyposis colorectal carcinoma.World J Gastroenterol，2004，10：2647-2651.]。对于已发现存在遗传性错配修复基因突变的患者，可以密切监测异时多原发癌和其他HNPCC相关肿瘤的发生，并对其家族中的其他成员，特别是尚未出现肿瘤的年轻成员进行相应检测，确认突变基因携带者，不但有助于对癌症易感个体重点进行临床监测和临床症状出现前的早期诊断，也可为遗传咨询和基因治疗提供依据，并可使非突变携带者免除不必要的精神和经济负担，对基因突变携带者，可以进行密切随访，以做到早期诊断，早期治疗。

与HNPCC致病密切相关的错配修复基因中，MLH1基因位于3p21-23，其突变率是所有相关基因中最高的。全球范围内对于MMR突变的研究很多，可是中国对此的研究很少。在所有的突变研究中，迄今为止，尚没有与本发明内容相似的报道。

发明内容