[发明专利]乙肝病毒的树突状细胞治疗性疫苗制备方法及其制备的乙肝病毒的树突状细胞治疗性疫苗

权利要求书

1.一种乙肝病毒的树突状细胞治疗性疫苗的制备方法，其特征在于，包含步骤：

1)构建乙肝病毒核心抗原HBcAg与免疫球蛋白G的Fc双基因共表达重组真核载体；

2)制备免疫刺激复合物：将步骤1)中获得的乙肝病毒核心抗原HBcAg与免疫球蛋白G的Fc双基因共表达重组真核载体加入皂苷Quil A，再加入胆固醇及卵磷脂，冰浴超声处理使溶液充分混匀并乳化，再用PBS透析，所得微絮状物即为形成的免疫刺激复合物；

3)步骤2)获得的免疫刺激复合物活化刺激树突状细胞获得所述细胞治疗性疫苗。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)包括：将HBcAg全长cDNA插入含有IRES的双基因共表达真核载体的IRES上游，再将Fc全长cDNA插入该真核载体的IRES下游，获得HBcAg和Fc双基因共表达重组真核载体。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述HBcAg全长cDNA经SEQ ID NO：3-4所示的引物扩增获得；所述免疫球蛋白G的Fc全长cDNA经SEQ ID NO：5-6所示的引物扩增获得。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)的免疫刺激复合物中，所述乙肝病毒核心抗原HBcAg与免疫球蛋白G的Fc双基因共表达重组真核载体、皂苷Quil A、胆固醇及卵磷脂的质量比为5∶10∶1∶1。

5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体为pT-Easy载体。

6.由权利要求1所述的方法制备的乙肝病毒的树突状细胞治疗性疫苗，其特征在于，其为免疫刺激复合物活化刺激树突状细胞所得的细胞治疗性疫苗，其中免疫刺激复合物主要由乙肝病毒核心抗原HBcAg与免疫球蛋白G的Fc双基因共表达重组真核载体、皂苷QuilA、胆固醇及卵磷脂组成。

7.根据权利要求6所述的乙肝病毒的树突状细胞治疗性疫苗，其特征在于，所述乙肝病毒核心抗原HBcAg与免疫球蛋白G的Fc双基因共表达重组真核载体是在含有内部核糖体进入位点IRES的双基因共表达真核载体的IRES上游和下游分别插入HBcAg全长cDNA和免疫球蛋白G的Fc全长cDNA而构成。

8.根据权利要求7所述的乙肝病毒的树突状细胞治疗性疫苗，其特征在于，所述HBcAg全长cDNA经SEQ ID NO：3-4所示的引物扩增获得；所述免疫球蛋白G的Fc全长cDNA经SEQ ID NO：5-6所示的引物扩增获得。

9.根据权利要求6-8任一项所述的乙肝病毒的树突状细胞治疗性疫苗，其特征在于，所述表达载体为pT-Easy载体。

10.根据权利要求9所述的乙肝病毒的树突状细胞治疗性疫苗，其特征在于，所述免疫刺激复合物中，乙肝病毒核心抗原HBcAg与免疫球蛋白G的Fc双基因共表达重组真核载体、皂苷Quil A、胆固醇及卵磷脂的质量比为5∶10∶1∶1。