[发明专利]同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及环境内分泌干扰物检测技术领域，更具体地说是一种能够同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，本发明还涉及所述的试剂盒在检测样品中多种环境内分泌干扰物中的应用。

背景技术

环境内分泌干扰物(Environmental endocrinedisrupting chemicals，EDCs)是指可干扰生物体内保持自身平衡、调节发育过程的内源激素的合成、分泌、运输、结合和代谢等过程的外源性化学物质。环境内分泌干扰物分为以下几类：多氯联苯类、二恶英类、烷基酚类、邻苯二甲酸二丁酯类、金属类、有机氯化合物环境激素类、植物雌激素类、真菌雌激素类，广泛存在于除草剂、杀虫剂、杀菌剂、防腐剂、增塑剂和洗涤剂等化工用品中。

目前EDCs已成为迫切需要治理的新一代环境污染物，微量的EDCs即可对正常激素作用产生影响，干扰内分泌机能，引起哺乳动物及人类的生殖障碍、发育异常及某些病理性损伤。这类物质不仅存在于工业废水、废气和生活污水中，在农产品中也可能存在。如果EDCs残留不能得到及时、准确地检测，它们就可能进入机体，并在体内直接或间接影响正常的激素代谢，给人类健康带来严重的危害。

建立一种快速的多组分EDCs残留物同时筛检的方法，便成为当前该研究领域亟需解决的问题之一。目前已有的EDCs检测或筛检方法主要包括体内试验、体外试验、生物标志物检测及仪器监测方法等。但是这些检测或筛检方法存在不足：

1.体内试验常采用子宫增重试验和子宫钙结合蛋白CaBP-9k mRNA表达检测和蛋白分析，该方法反应敏感具有专一性，但是其成本高，灵敏度低，不适于大规模的快速筛检；

2.体外试验主要有E-Screen法、受体竞争试验等，试验本身的特异性较差，容易出现假阳性结果；

3.借助于HPLC或LC-MS联用技术等大型精密仪器建立起来的EDCs仪器检测方法，对EDCs的检测虽说具有很高的灵敏度，但是该方法不能一次就鉴定出分析物的结构，往往还需要用GC-MS确认结构，技术成本较高，传统方法所需的时间一般都较长，有的甚至长达几个小时，操作复杂，不能用于现场的快速检测。

4.以上几种方法对于EDCs的检测和分析，一般都存在检测灵敏度低、成本高、结果假阳性、检测过程复杂、不适于现场快速检测等缺点，因此不能满足实际检测的需要。

发明内容

本发明为了解决以上技术问题，提供了一种检测速度快、选择性高、能同时检测多种环境内分泌干扰物的试剂盒。

本发明还提供了一种该试剂盒在检测痕量环境内分泌干扰物中的应用。

本发明是通过以下方式实现的。

同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征在于：采用以下步骤制成的：

(1)选择化学发光试剂，分别配制每种发光试剂的溶液，所述发光试剂为高锰酸钾、盐酸和聚山梨酯-80；

(2)选择功能单体，所述功能单体能与环境内分泌干扰物合成分子印迹溶胶凝胶；

(3)选用环境内分泌干扰物分子为模板分子，将模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均匀制成环境内分泌干扰物的分子印迹溶胶凝胶；

(4)利用层层修饰技术，将分子印迹溶胶凝胶修饰到微孔板内表面上，用保鲜膜封存数小时；

(5)将步骤(4)中晾干的修饰微孔板浸泡于洗脱剂中洗脱，清洗，吹干；

(6)将步骤(5)中吹干的修饰微孔板的进样器端口分别插入步骤(1)中制得的发光试剂溶液中，得到所述同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒。

所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征还在于：所述功能单体为丙烯酸、甲基丙烯酸或4-乙烯基吡啶；所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N、N-亚甲基二丙烯酰胺、3，5-二(丙烯酰胺)苯甲酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯或季戊四醇三丙烯酸酯；所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亚砜；所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。

所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征还在于：所述模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为0.2～1∶2∶0.5～5∶40～65∶0.1～0.15∶2.0～30。

所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征还在于：将所述分子印迹溶胶凝胶修饰到微孔板内表面上包括以下步骤：

(a)将微孔板用NaOH超声波清洗，然后用水清洗，吹干；