[发明专利]中国仓鼠凋亡相关基因

权利要求书

1.一种分离的多肽，其包含与SEQ ID NO：4所示的序列具有至少99％序列同一性的序列，所述多肽能够介导中国仓鼠卵巢(CHO)细胞凋亡。

2.权利要求1所述的分离的多肽，其包含SEQ ID NO：4所示的序列。

3.一种分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1或2所述多肽的序列。

4.一种分离的多核苷酸，其包含与SEQ ID NO：8所示的序列具有90％或更高序列同一性的序列；或与其互补的、能够在严格条件下与其杂交的、或由于遗传密码而与其具有简并性的序列，所述多核苷酸序列编码能够介导中国仓鼠卵巢(CHO)细胞凋亡的多肽。

5.一种表达序列，包含与调控序列可操作连接的根据权利要求3或4的多核苷酸或其部分，所述调控序列能够指导所述多核苷酸的表达，其中所述表达序列优选是表达载体。

6.一种构建体，其能够在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中减量调节或抑制与SEQ ID NO：4所示的序列具有至少99％序列同一性的序列的表达。

7.根据权利要求6所述的构建体，其中所述构建体包括反义构建体、抑制载体构建体、包含与SEQ ID NO：4所示的序列具有至少99％序列同一性的序列的无功能变体的构建体、双链(ds)RNA构建体、小干扰RNA(siRNA)构建体，或显性阴性突变体构建体。

8.权利要求6或7所述的构建体，其中所述构建体包含具有序列5’-GATCCCGCGGATCCTTGAACCTGATTTCAAGAGAATCAGGTTCAGGATCCGCTTTTTTGGAAAAGCTT-3’、SEQ ID NO：15、或SEQ ID NO：16的小干扰RNA(siRNA)插入。

9.根据权利要求6到8任一项所述的构建体，其中所述构建体包含具有SEQ ID NO：40所示序列的质粒。

10.一种细胞，其包含根据权利要求5所述的表达序列，或根据权利要求6到9任一项所述的构建体。

11.根据权利要求10所述的细胞，其中所述表达序列或构建体被转染或稳定整合入该细胞。

12.一种经修饰的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或该经修饰细胞的后代，其中较之未经如此修饰的细胞，所述经修饰细胞减量调节具有SEQ ID NO：4所示的序列或与其有至少99％的序列同一性的序列的多肽的表达，或者具有SEQ ID NO：8所示的序列或与其有至少99％的序列同一性的序列的多核苷酸的表达。

13.一种细胞系，其包含权利要求10、11或12所述的细胞，或其后代。

14.一种细胞培养物，其包含权利要求10、11或12所述的细胞，或其后代，或权利要求13所述的细胞系。

15.一种转基因非人动物，其包含权利要求10、11或12所述的细胞，或其后代。

16.一种产生重组蛋白的方法，所述方法包括提供根据权利要求10到12所述的细胞，所述细胞包含能够表达所述重组蛋白的表达载体，并且导致所述重组蛋白在所述细胞中自所述表达载体表达。

17.一种方法，包括在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中减量调节具有SEQ IDNO：4所示的序列或与其有至少99％的序列同一性的序列的多肽、或具有SEQ ID NO：8所示的序列或与其有至少99％的序列同一性的序列的多核苷酸的表达。

18.根据权利要求17所述的方法，其包括将权利要求6到9中任一项所述的载体暴露于所述细胞，将所述构建体转染入所述细胞内或将所述构建体稳定整合入所述细胞。

19.根据权利要求6到9任一所述的构建体、权利要求10到12任一所述的细胞、权利要求13所述的细胞系、权利要求14所述的细胞培养物、或者权利要求15所述的转基因非人动物用于产生蛋白质的用途，所述蛋白质优选是异源蛋白，更优选来自外源导入的序列，最优选是重组蛋白，优选是干扰素γ。

20.根据权利要求10到12任一项所述的细胞、权利要求13所述的细胞系、权利要求14所述的细胞培养物、权利要求15所述的转基因非人动物、或权利要求16到18任一项所述的方法，其中较之所述多肽的表达未被如此调节的细胞：(i)所述细胞的细胞生存力提高或增强，优选其中所述细胞的凋亡减少；(ii)所述细胞的蛋白质产量，优选重组表达的蛋白质产量提高或增强；和/或(iii)所述细胞所表达的蛋白质的糖基化，优选唾液酸化作用提高或增强。