[发明专利]猪干扰素基因家族及其作为抗猪蓝耳病药物及疫苗佐剂的应用

说明书

技术领域

本发明属遗传工程技术领域，具体涉及一种新的猪干扰素基因家族及其作为抗猪蓝耳病药物及疫苗佐剂的应用。

背景技术

猪I型干扰素有数种型，每一型内又各有一组多基因家族，它们是具有抗病毒作用的细胞因子家族。在正常生理条件下，它们在动物体内不表达或有少量组成型表达。在机体被病毒感染时，它们不但有抗病毒作用，还可以上调机体的免疫反应，达到清除病毒的作用。研究表明，I型干扰素还可以激活B细胞并辅助B细胞快速产生针对病原的抗体；促进大多数细胞MHC-I类抗原的表达，诱导NK细胞及T细胞的增殖并增加其细胞毒活性；辅助CD8⁺记忆T细胞的生长，延长记忆T细胞的生存时间；并且对IFN-γ，IL-1β，IL-2，IL-6，TNF-α等免疫刺激细胞因子具有表达上调作用。因此和疫苗联合使用，具有佐剂功能。由于此基因来源于猪本身，其安全性较为可靠。故我们利用其抗病毒和免疫增强的双重作用，尝试用其做为抗猪蓝耳病药物和疫苗佐剂。

蓝耳病又称繁殖与呼吸综合症(reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，以妊娠母猪的繁殖障碍(流产、死胎、木乃伊胎)及各种年龄猪特别是仔猪的呼吸道疾病为特征，其危害已几乎遍极世界所有养猪国家。特别是近几年PRRS高致病性变异毒株在我国的暴发流行，具有高发病率、高死亡率和低治愈率的流行特点使我国养猪业面临着巨大的疫病风险。

目前使用的蓝耳病疫苗有弱毒苗和灭活苗两种。其中弱毒苗的免疫原性较强，对猪具有一定的保护能力，但是弱毒苗可能出现回复突变，使弱毒转换为强毒，因此安全性存在问题。研究表明：弱毒疫苗的毒株可以在猪群中传播，导致未免疫的猪出现繁殖障碍等蓝耳病症状。至今国内外已研究制备多种灭活疫苗，但是现有报告说明，灭活苗的免疫原性都较差，对免疫猪只的保护效果很低。由于灭活苗安全性好，因此通过各种途径，增强灭活疫苗的保护能力是当前抗猪蓝耳病研究的重大任务。为此将灭活苗和各类细胞因子共同使用，试图提高灭活苗的免疫原性是一条切实可行的研究途径。

发明内容

本发明的目的在于提供一种安全性好的新的猪干扰素基因家族及其应用。

本发明提供的猪干扰素基因家族是在猪基因组中新分离得到的，前人尚未分离获得过，共5条基因，其氨基酸序列依次为SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.5，SEQ IDNO.7，SEQ ID NO.9；其对应的核苷酸序列为SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.8，SEQ ID NO.10。研究表明他们属于I型干扰素，具有抗病毒作用。

本发明所述的从家猪基因组中分离到的干扰素基因家族可以用于制备抗猪病毒药物和佐剂。

所述猪病毒为猪蓝耳病病毒，猪口蹄疫病毒，猪流感病毒，或猪圆环病毒等。

具体可以将所述干扰素基因利用分子生物学技术克隆入真核表达载体，获得重组质粒；所述真核表达载体是具有真核启动子，原核复制子或原核抗性基因为特征的任一种DNA表达载体。

所述的重组质粒可以单独使用，也可以由任一具辅助质粒进入真核细胞作用的试剂配合使用，促使质粒进入动物体。

或者由所述的重组质转入猪霍乱沙门氏菌弱毒株或其他沙门氏菌弱毒株，或将所述家猪干扰素基因与与重组腺病毒，慢病毒等任一病毒载体相连，获得的活菌苗或活疫苗。

本发明还提供一种用所述家猪基因组中分离到的干扰素基因家族制备的抗猪病毒药物和佐剂。所述猪病毒包括猪蓝耳病病毒，猪口蹄疫病毒，猪流感病毒，或猪圆环病毒等。

本发明尤其提供一种以家猪干扰素基因为基础制备的蓝耳病药物和蓝耳病疫苗佐剂，及其制备方法。并将该药物和佐剂应用于动物体评估其效果。

本发明提出的家猪新型干扰素具有抗蓝耳病病毒作用。实施例中，SEQ ID NO.1，SEQID NO.2所表达干扰素在MARK-145细胞上抗PRRSV病毒的作用比猪IFN-α高5-10倍。在猪体内可以抵抗PRRSV病毒的攻击，保护率达80％。本发明提出此类新干扰素可以作为抗猪蓝耳病药物和灭活疫苗佐剂，可以增强灭活苗的免疫保护效果，免疫猪保护率达到80％。