[发明专利]离子对色谱法测定酒花中α-酸和β-酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种采用离子对色谱法测定酒花中α-酸和β-酸的方法。该方法用三乙醇胺作为离子对试剂，实现了在弱酸性流动相条件下对酒花酊中3种α-酸和3种β-酸的同时测定。

技术背景

酒花，又名啤酒花、忽布、蛇麻花，是酿造啤酒的重要原料，赋予啤酒特有的香气苦味，增加啤酒的防腐能力。酒花虽然在啤酒生产中的添加量很少，但对其质量影响是不可忽视的。酒花的成分很复杂，其主要成分包括酒花树脂、酒花精油、单宁、果胶、含氮化合物和碳水化合物。酒花中的软树脂是酒花香味和苦味的主要来源，分为α-酸和β-酸两类。α-酸主要包括葎草酮(humulone)、合葎草酮(cohumulone)、加葎草酮(adhumulone)；β-酸主要包括蛇麻酮(lupulone)、合蛇麻酮(colupulone)、加蛇麻酮(adlupulone)。α-酸赋予特有的苦味、增加泡沫，β-酸的作用为辅助苦味。两者都有防止杂菌污染的作用。为了获得柔和与适口的苦味，掌握酒花中α-酸和β-酸的含量是非常重要的。

以前对α-酸和β-酸的分析多采用分光光度法和电导滴定法，并且只能对α-酸和β-酸的总量进行测定，不能对各个化合物定量，专属性差。近年来多采用高效液相色谱法进行测定。但是，目前的高效液相色谱方法为了使α-酸和β-酸在色谱柱上有较好的保留能力，都采用较强酸性条件的流动相。而酸性条件对色谱柱损害较大，且不能将葎草酮和加葎草酮分离开。因此，需要开发一种酒花中α-酸和β-酸分析的新方法解决这些问题。

发明内容

本发明的目的正是针对以往分析酒花中α-酸和β-酸时存在的问题而提供的一种采用离子对色谱法测定酒花中α-酸和β-酸的方法，即用碱性的三乙醇胺作为离子对试剂，用反相液相色谱方法在弱酸性条件下，实现3种α-酸和3种β-酸的同时测定。该方法避免了强酸性条件对色谱柱的损害，并且对六种化合物都能获得较好的分离效果，从而实现同时测定。

本发明的测定酒花中α-酸和β-酸的方法包括以下步骤：

a、样品制备：对于酒花酊剂，称取一定重量酒花酊剂，用4～6倍重量比的色谱纯甲醇稀释后，经0.25μm有机相滤膜过滤；对于酒花浸膏样品，称取一定重量浸膏，用380～420倍重量比的色谱纯甲醇溶解，经0.25μm滤膜过滤；该方法处理简单，无需进一步样品净化步骤。

b、将a步骤制备好的样品用液相色谱-二极管阵列检测器分析，分析条件如下：

色谱柱：Zorbax SB-C18分析柱(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相：有机相为甲醇；水相为0.15M三乙醇胺的水溶液，经磷酸调pH至6.0；

梯度洗脱条件：起始有机相比例为60％；40分钟后有机相比例达到80％；50分钟后有机相比例升高到100％；

进样体积10μL，流速为0.8mL/min，柱温30摄氏度。

检测波长：3种α-酸的检测波长为328nm，3种β-酸的检测波长为356nm。

在上述条件中，三乙醇胺是本方法的关键。在pH6.0左右的酸度下，三乙醇胺结合氢离子形成阳离子，同时，α-酸和β-酸在该条件下，电离产生负离子，两种离子形成离子对化合物，在C18的色谱柱上得到较好的保留，从而实现其分离。

本方法与原有的酒花中α-酸和β-酸的分析方法相比，采用了离子对试剂，避免了强酸性流动相的使用，并且对α-酸和β-酸的分离效果要优于现有方法，实验的重复性和回收率很好，适用于大批量样品的分析。

附图说明

图1酒花浸膏样品色谱图。

图2酒花酊样品色谱图。

具体实施方式

本发明以下将通过实施例作进一步说明：

实施例1

准确称取酒花浸膏样品0.0507克，用400倍重量比的色谱纯甲醇溶解定容，将获得溶液经0.25μm有机相滤膜过滤除去不溶物质，进样分析；

液相色谱分析条件：

色谱柱：Zorbax SB-C18分析柱(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相：有机相为甲醇；水相为0.15M三乙醇胺的水溶液，经磷酸调pH至6.0；

梯度洗脱条件：起始有机相比例为60％；40分钟后有机相比例达到80％；50分钟后有机相比例升高到100％；

进样体积10μL，流速为0.8mL/min，柱温30摄氏度；

检测波长：3种α-酸的检测波长为328nm，3种β-酸的检测波长为356nm。

所得样品谱图如图-1所示。

实施例2