[发明专利]用于检测H5亚型禽流感病毒的生物芯片及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种用于检测H5亚型禽流感病毒的生物芯片，其特征在于，所述生物芯片包括固相载体、附着于固相载体上的金膜、以及与该金膜相连接的抗H5N1亚型禽流感病毒单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的生物芯片，其特征在于，所述金属膜的厚度为50～100nm。

3.根据权利要求1或2所述的生物芯片，其特征在于，所述生物芯片还包括位于所述金属膜上的修饰层，选自聚丙烯酰胺、琼脂糖及葡聚糖或其衍生物；优选地，所述葡聚糖衍生物为羧甲基葡聚糖。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的生物芯片，其特征在于，所述生物芯片的固相载体选自玻璃、陶瓷、金属片、尼龙膜和硝酸纤维素膜，优选为玻璃，其规格为18mm×18mm×0.14mm。

5.制备权利要求1至4中任一项所述生物芯片的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)在生物芯片的固相载体上附着金膜；

2)将抗H5N1亚型禽流感病毒单克隆抗体固定在步骤1)所得到的金膜表面。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述步骤1)是通过真空蒸发镀膜法在生物芯片的固相载体上附着金膜；优选地，所述步骤1)还包括用聚丙烯酰胺、琼脂糖、葡聚糖或其衍生物修饰金膜的步骤；更优选地，所述步骤2)是通过氨基偶联的方法在修饰的金膜上固定抗H5N1亚型禽流感病毒单克隆抗体。

7.权利要求1至4中任一项所述生物芯片在检测H5亚型禽流感病毒及确定其含量中的用途。

8.使用权利要求1至4中任一项所述生物芯片的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)待测样品的处理；

2)将权利要求1至4中任一项所述生物芯片安装在表面等离子体谐振设备上；

3)将步骤1)中得到的样品加入至步骤2)中的生物芯片上进行反应；优选地，所述反应条件如下：反应流速10～100μl/分钟，反应体积为500～1000μl，在室温下反应20～60分钟；

4)利用表面等离子体谐振设备对所述检测生物芯片上反应发生区进行偏振光检测。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，其中所述步骤1)是通过样品处理缓冲液对待测样品进行处理，所述样品处理缓冲液成份如下：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na₂HPO₄ 4.3mmol/L，KH₂PO₄ 1.4mmol/L及2％(v/v)Triton X-100，pH 7.2；优选地，所述样品处理缓冲液与样品的体积比为1∶1，处理时间优选为90分钟或90分钟以上。