[发明专利]具有抗Cd2+和抗Cu2+功能的基因DvCRP2、其编码蛋白及应用

权利要求书

1.一种具有抗Cd²⁺和抗Cu²⁺功能的基因DvCRP2，其特征在于该基因具有下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID NO：1所示的碱基序列；

2)与SEQ ID NO：1所限定的核酸序列具有95％以上的同源性，且编码相同生物学功能蛋白质的DNA序列。

2.一种根据权利要求所述的基因DvCRP2编码的蛋白，其特征在于该蛋白具有下列氨基酸序列之一：

1)具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；

2)通过将SEQ ID NO：2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加而产生的衍生蛋白质的氨基酸序列，该衍生蛋白质与SEQ ID NO：2的蛋白具有相同的生物学功能。

3.一种重组载体，其特征在于该重组载体含有权利要求1所述的DvCRP2基因。

4.一种宿主细胞，其特征在于该宿主细胞含有权利要求3所述的重组载体。

5.权利要求1所述的DvCRP2基因在提高生物抗镉和抗铜能力中的应用。

6.权利要求1所述的DvCRP2基因在增加生物体内镉和铜的积累量方面的应用。

7.权利要求2所述的DvCRP2基因编码的蛋白在提高生物抗镉和抗铜能力中的应用。

8.权利要求2所述的DvCRP2基因编码的蛋白在增加生物体内镉和铜的积累量方面的应用。

9.一种克隆根据权利要求1所述的DvCRP2基因的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

a)将酵母表达文库通过LiAc热击法转化酵母突变体Δyap1，在150μM Cd²⁺的筛选压力下筛选突变表型回复的酵母转化子，得到候选克隆；

b)将步骤a)得到的候选克隆所携带的表达载体从酵母细胞中分离出来，转化大肠杆菌进行扩增；把扩增以后的载体回转酵母突变体Δyap1，得到在150μM Cd²⁺的胁迫处理下仍能够正常生长的阳性克隆；

c)利用限制性内切酶EcoRI/XhoI消化步骤b)得到的阳性克隆释放出插入片段，构建到测序载体中，通过测序获得DvCRP2基因的部分cDNA序列；

d)在步骤c)得到的部分cDNA序列上设计两条5’RACE引物，引物序列分别为：

5’-cgcctgtctgcagtggccgcgacg-3’

5’-gcagcacactgtgtctcaaggctctcat-3’，

使用SMART^TM RACE cDNA amplification kit试剂盒进行5’cDNA扩增反应，回收最长的扩增产物连接到测序载体上，通过测序获得盐藻DvCRP2基因的全长编码序列。