[发明专利]白色念珠菌Sap2表位与噬菌体外壳蛋白的杂合蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程中的DNA重组技术领域，具体涉及杂合蛋白及其应用。 

背景技术

白色念珠菌是一种寄生于健康宿主皮肤、粘膜的正常菌群。当机体的免疫力下降或者正常菌群平衡被破坏时，会侵入深层组织引起系统性白色念珠菌感染。它是一种酵母样真菌，在不同条件下能以孢子、酵母和菌丝体等多种形态存在，不同形态表达的抗原也不同。 

随着肿瘤放疗、化疗和大量广谱抗生素的使用，系统性白色念珠菌感染的发病率不断升高。由于白色念珠菌感染缺少明显的临床症状，所以导致早期诊断困难。临床上多采用血培养法，这种方法需要经过反复培养，耗时长、检出率低，并且通常在感染的晚期才能得到阳性结果，患者往往错过最佳的治疗时机。因此，寻找系统性白色念珠菌感染的早期检测方法对于该类疾病的诊断和治疗是非常重要的。在治疗方面，主要采用抗真菌药物治疗，抗真菌药物不仅价钱贵，而且具有很大的副作用，如肾毒性等。免疫疗法被认为是治疗真菌感染的有效途径。 

发明内容

本发明的目的是确立一种白色念珠菌Sap2表位与噬菌体外壳蛋白的杂合蛋白，并且提供该杂合蛋白在制备系统白色念珠菌感染临床检测、预防和治疗的药物中的应用。 

本发明采用噬菌体展示技术，将一种白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶2(Sap2)的抗原表位基因重组到一种整合有噬菌体主要外壳蛋白基因的表达质粒中，形成重组载体。利用CaCl₂法将重组载体转化大肠杆菌TG1宿主细胞。外源基因在宿主细胞内表达，与噬菌体外壳蛋白一起组装而形成一种杂合蛋白，并随噬菌体分泌到细胞外。利用生物化学方法提取和纯化展示有表位的杂合蛋白。 

本发明的杂合蛋白是含有白色念珠菌Sap2表位(SLAQVKYTSASSI)的丝状噬菌体基因8杂合外壳蛋白。这种杂合蛋白基因的核苷酸序列为： 

atg aaa aag tct tta gtc ctc aaa gcc tcc gta gcc gtt gct acc ctc  48 

gtt ccg atg ctg tct ttc gcc gcg gag ggt tct ttg gct caa gtc aaa   96 

tat act tct gct tcc agt att cca tcg aac gat cct gca aaa gcg gcc   144 

ttt gac tcc ctg caa gcc tca gcg acc gaa tat atc ggt tat gcg tgg   192 

gcg atg gtt gtt gtc att gtc ggc gca act atc ggt atc aag ctg ttt   240 

aag aaa ttc acc tcg aaa gca agc                                   264 

这种杂合蛋白的氨基酸序列为： 

Met Lys Lys Ser Leu Val Leu Lys Ala Ser Val Ala Val Ala Thr Leu 

1               5                   10                  15 

Val Pro Met Leu Ser Phe Ala Ala Glu Gly Ser Leu Ala Gln Val Lys 

            20                  25                  30 

Tyr Thr Ser Ala Ser Ser Ile Pro Ser Asn Asp Pro Ala Lys Ala Ala 

        35                  40                  45 

Phe Asp Ser Leu Gln Ala Ser Ala Thr Glu Tyr Ile Gly Tyr Ala Trp 

    50                  55                  60 

Ala Met Val Val Val Ile Val Gly Ala Thr Ile Gly Ile Lys Leu Phe 

65                  70                  75                  80