[发明专利]奶牛乳汁孕酮检测生物传感器

权利要求书

1.奶牛乳汁孕酮检测生物传感器，其特征在于：通过抗原-抗体反应，将孕酮完全抗原修饰于丝网印刷电极上，在丝网印刷电极上建间接竞争ELISA法。

2.根据权利要求1所述的奶牛乳汁孕酮检测生物传感器，其特征在于：所述修饰电极的孕酮完全抗原与待测抗原竞争结合孕酮单克隆抗体，辣根过氧化物酶标记第二抗体与孕酮单克隆抗体结合。

3.根据权利要求1或2所述的奶牛乳汁孕酮检测生物传感器，其特征在于：用建立在丝网印刷电极上的间接竞争ELISA法定量检测奶牛乳汁孕酮。

4.根据权利要求1或2所述的奶牛乳汁孕酮检测生物传感器，其特征在于：制备方法采用丝网印刷工艺制备三电极结构的电化学传感器，首先在PET薄膜上印刷银导电轨道，然后用碳浆印制碳电极，其中直径3mm的圆盘为工作电极，而半环为对电极，最后，印刷绿色油墨作为绝缘层，仅露出电极和连接处，在用丝网印刷电极制作的工作电极上滴加5μL P₄-OVA，37℃孵育45min；洗涤液洗涤两次；用0.5％牛血清白蛋白封闭，在工作电极上滴加50μL，37℃孵育60min；洗涤液洗涤两次；制备好的生物传感器置于4℃密闭的环境中备用。

5.根据权利要求3所述的奶牛乳汁孕酮检测生物传感器，其特征在于：生物传感器的使用方法：在工作电极上滴加2.5μL孕酮单克隆抗体和竞争孕酮抗原5μL，37℃作用45min；洗涤液冲洗两次；滴加酶标二抗，湿盒37℃孵育40min，洗涤液冲洗两次；在电极上滴加底物TMB-H₂O₂，滴加100uL；用计时电流法测定电化学信号，将所得电流值代入建立的曲线方程求出乳汁样品中的孕酮含量。