[发明专利]一种用于检测犬、猫的狂犬病毒抗体的胶体金试纸卡及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测犬、猫狂犬病病毒抗体的胶体金试纸卡，属于宠物抗体检测领域。

背景技术

狂犬病(Rabies)是一种由狂犬病病毒(Rabies virus，RV)引起的人畜共患病。迄今为止，还没有有效的方法治疗狂犬病，一旦发病，死亡率几乎是100％。据世界卫生组织报道，全球每年有50000至100000人因狂犬病而死亡。犬、猫是狂犬病的主要传染源。因此，对于狂犬病的控制关键在于切断传染源，对犬、猫进行免疫接种。但是犬、猫免疫是否有效，需要检测其体内的抗体水平。目前，检测RV抗体常用的方法有传统的小鼠中和试验(Mouse neutralization test，MNT)、WHO推荐的快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent focus inhibition test，RFFIT)、OIE推荐的荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibody virusneutralization test，FAVN)和酶联免疫吸附实验(Enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)。这些方法需要技术熟练的专业人员、昂贵的仪器设备和试剂，需要接触RV标准攻毒株，以及检测时间较长，给基层检测RV免疫抗体带来了一定的困难。为有效预防和控制狂犬病，建立一种快速、便捷、特异的抗体检测方法是十分必要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种方便、快捷地既能检测犬的又能检测猫的狂犬病病毒抗体的胶体金试纸卡(也可称作检测卡、试纸条、检测条等)，通过在硝酸纤维素膜(NC膜)上同时包被狂犬病病毒相关抗原(如狂犬病病毒核蛋白)、金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)抗体两个条带，并采用胶体金标记SPA，得到了一种通用型检测试纸卡，应用免疫层析原理检测犬、猫血清中的狂犬病病毒免疫抗体，实现检测犬和猫两种动物狂犬病病毒抗体的目的。克服了现有检测技术操作复杂、繁琐、检测时间长、需要仪器、不能用同一种试纸卡检测不同动物中抗体的不足。

本发明的另一目的是提供一种用于检测犬、猫的狂犬病病毒抗体的胶体金试纸卡的制备方法。

本发明的再一目的是提供一种用于检测犬、猫的狂犬病病毒抗体的胶体金试纸卡的应用。

本发明的再一目的是提供一种包括本发明的用于检测犬、猫的狂犬病病毒抗体的胶体金试纸卡的试剂盒。

为了实现本发明目的，本发明提供了一种用于检测犬、猫的狂犬病病毒抗体的试纸卡，其包括：

(1)同时包被狂犬病病毒相关抗原、SPA抗体两个条带的硝酸纤维素膜，

(2)包被有胶体金标记SPA的玻璃纤维膜。

所述的狂犬病病毒相关抗原包括狂犬病病毒颗粒或基因工程制备的狂犬病病毒抗原。

本发明所述的试纸卡还包括：反应支持物、吸水纸、样品垫和塑料卡。

其中，狂犬病病毒相关抗原优选为狂犬病病毒核蛋白(即N蛋白)，反应支持物优选为PVC板，吸水纸优选为滤纸，样品垫优选为玻璃纤维膜，塑料卡具有滴加样品窗口和观察窗口。

本发明还公开了该试纸卡在检测犬、猫狂犬病病毒抗体中的应用。

一种用于检测犬、猫的狂犬病病毒抗体的试纸卡的制备方法，包括如下步骤：

a.胶体金标记SPA的制备及其纯化：

往pH值为5.2-5.5(优选为5.3)的胶体金的溶液中加入SPA和封闭剂，胶体金与SPA的配比为：相对于每毫升胶体金，SPA为3-5μg，得到胶体金标记SPA(即金标SPA)，再通过差速离心对其进行纯化；

b.包被有胶体金标记SPA的玻璃纤维膜的制备：

将纯化后的金标SPA涂布至玻璃纤维膜上，并进行干燥，避光保存备用；

e.同时包被狂犬病病毒相关抗原、SPA抗体两个条带的硝酸纤维素膜的制备：

分别用狂犬病病毒相关抗原(如狂犬病病毒核蛋白)、SPA抗体在硝酸纤维素膜上划线，分别作为试纸卡中的检测线T与质控线(也叫对照线)C，并进行孵育或干燥，其中所述狂犬病病毒核蛋白的浓度为1.2±0.1mg/ml，SPA抗体的浓度为1.5±0.1mg/ml。

f.试纸卡的组装

依次将同时包被狂犬病病毒相关抗原和SPA抗体两个条带的硝酸纤维素膜、包被有胶体金标记SPA的玻璃纤维膜、样品垫、吸水纸粘贴到反应支持物上。

其中，胶体金溶液采用柠檬酸钠还原法制得。

狂犬病病毒核蛋白(N蛋白)通过原核表达制得。

SPA及SPA抗体没有特别地限制，可为已知或者市售的。