[发明专利]ADRB1基因SNP检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种ADRB1基因检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

肾上腺素能受体基因(adrenergic receptor，ADRB)分3种亚型，分别是ADRB1(β1-adrenergicreceptor)、ADRB2和ADRB3，其编码的肾上腺素能受体是与鸟嘌呤核苷蛋白(G蛋白)耦联的受体家族成员之一，广泛分布于脂肪细胞。肾上腺素能受体与儿茶酚胺结合后激活腺苷酸环化酶(AC)使环磷酸腺苷(cAMP)生成增多，进一步激活蛋白激酶A，通过作用于多种脂代谢相关的酶类、离子通道及转录因子，促进脂肪分解。

其中，ADRB1基因位于人染色体10q24-q26区域，其编码的β1肾上腺素能受体是存在于心肌细胞的一类重要的肾上腺素受体，由477个氨基酸残基组成，属于G蛋白偶联受体超家族。ADRB1基因存在2个重要的单核苷酸多态性(SNP)，一个是A145G(rs1801252)，使编码的49位丝氨酸被甘氨酸取代(Ser→Gly)，另一个位点G1165C(rs1801253)，相应的第389位氨基酸由甘氨酸变成精氨酸(Gly→Arg)。Gly389Arg变异位于细胞内羧基末端Gs蛋白偶联部位，可增强腺苷酸环化酶活性，在中国人中的突变频率在70％左右。美国学者Johnson等的相关性研究发现，389Arg纯合子病人服用美托洛尔后日间舒张压的下降值几乎是其他不同基因型者的3倍。Sofowora等对34名健康志愿者的研究也得到了类似结果，口服25mg阿替洛尔后，389Arg纯合子志愿者的静脉收缩压和平均动脉压的下降均显著高于389Gly纯合子者。

此外，动物实验和人群研究皆证实ADRB1基因的2个多态性Gly389Arg、Ser49Gly与肥胖有关。携带389Arg等位基因的美国高加索女性有更高的BMI和体重，携带Gly389Arg基因突变的瑞典妇女的BMI比携带Ser49Gly基因突变的妇女高。携带Gly49-Gly389组合基因型的瑞典人与携带其他基因型的瑞典人相比，BMI升高0.7kg/m²。

目前检测ADRB1的产品一般是基于PCR技术的RT-PCR、荧光定量PCR、传统的固相芯片技术、直接测序、PCR-RFLP等，该技术存在灵敏度低，样品易污染、假阳性率高的缺点，同时由于检测通量的局限性，不能满足实际应用的需要。

发明内容

本发明的目的之一是提供ADRB1基因SNP检测液相芯片。该液相芯片可用于检测ADRB1基因两种常见基因型A145G(rs1801252)和C1165G(rs1801253)的野生型和突变型。

实现上述目的的技术方案是：

一种ADRB1基因SNP检测液相芯片，主要包括有：

(A)针对ADRB1基因的SNP位点，分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对SNP位点的特异性引物组成，所述特异性引物是：针对A145G SNP位点的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、和/或针对C1165G SNP位点的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4；

(B)分别包被有特异的anti-tag序列的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列选自SEQID NO.9～SEQ ID NO.12中的序列，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；

(C)用于扩增出具有A145G和/或C1165G的SNP位点的ADRB1基因目标序列的扩增引物。

优选地，所述扩增引物为：针对A145G SNP位点的SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、和/或针对C1165G SNP位点的SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16。

优选地，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述间隔臂序列为5-10个T。

本发明的另一目的是提供一种用于ADRB1基因SNP检测的特异性引物。

具体技术方案如下：

主要包括有：针对A145G SNP位点的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、和/或针对C1165G SNP位点的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8。

本发明的主要优点在于：