[发明专利]KIF6、apo E基因和染色体9p21区段SNP检测液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种KIF6、apoE基因和染色体9p21区段SNP位点检测液相芯片。 

背景技术

KIF6(Kinesin-like protein 6)编码驱动蛋白样蛋白-6，为分子动力超家族中的一员。CARE、WOSCOPS及PROVE IT-TIMI 22三项研究均表明，KIF6基因Trp719Arg(rs20455T＞C)与冠脉事件的相关性。KIF6基因Trp719Arg多态性在高加索人群中达到60％，具有719Arg多态性的人患冠心病(CHD)的风险增加55％。与非携带者相比(HR＝0.94)，KIF6719Arg等位基因携带者应用他汀强化治疗较他汀常规治疗获益更多(HR＝0.59)，强化治疗使携带者发生冠脉事件的绝对危险降低10.0％，非携带者仅降低0.8％。 

载脂蛋白E(Apolipoprotein E，apo E)是血浆中重要的载脂蛋白之一。Apo E主要在肝脏合成、分泌和代谢过程中参与脂质的运输、储存及排泄，有修复组织、抑制血小板聚集、免疫调节等作用。人apo E的基因位于第19号染色体长臂13区2带(19q132)上，基因全长为3.7kb，含有4个外显子和3个内含子，其cDNA长为1.163kb。apoE蛋白前体由317个氨基酸组成，含有18个氨基酸信号肽，成熟的Apo E蛋白由299个氨基酸组成。Apo E基因有三个等位基因，即ε2、ε3和ε4，共构成6种不同的基因型：3种纯合型(ε2/ε2、ε3/ε3、ε4/ε4)和三种杂合型(ε3/ε4、ε2/ε3、ε2/ε4)。其基因发生频率因不同的种族和地区存在差异，在一般人群中，ε2约占8％，ε3约占78％，ε4占14％。由于编码apoE肽链上第112位和158位氨基酸相对应核苷酸的多态性差异，三种不同的等位基因转录、翻译成三种不同的蛋白异构体，即apo Eε3肽链的第112和158位上的氨基酸分别为半胱氨酸(Cys)和精氨酸(Arg)，而apoEε2是在第158位上的Arg被Cys取代，apo Eε4则在第112位上的Cys被Arg所取代。研究发现，不同基因型人群的心血管疾病风险依ε2＜ε3＜ε4次序增大，ε2/ε2的携带者倾向于发生III型的高血脂，ε4等位基因与血浆中胆固醇水平的上升以及由此引致的冠心病风险的提高相关，apo E基因型在预测心脏病相关的环境因素、斯他汀治疗、饮食治疗等对患者的治疗效果中起着重要作用。 

WTCCC于2007年对1926例患有冠心病/心肌梗塞或有严重家族史者和2938名对照受试者的全基因组关联研究结果显示：与冠心病相关性最大的多态性位点rs1333049(G＞C)位于9p21区域(P＝ 1.80×10-14)。该研究结果于2008年经在东亚人群中得到验证。2009于中国人群中得到证实。PROVEIT-TIMI 22研究同样证实：rs1333049C等位基因携带者应用他汀强化治疗较他汀常规治疗获益更多。同时，与冠心病相关的多态性位点还有A22086055G(rs10757274)、A22114477G(rs10757278)、A22105026G(rs2383206)、A22105959G(rs2383207)和A22088619G(rs2891168)，此5个位点均与rs1333049(G22115503C)完全连锁。 

目前国内外关于心血管疾病风险的检测日渐增多，已有检测apo E基因多态性的产品上市，如Celera公司、上海主健生物工程有限公司的检测产品，目前的产品一般基于PCR技术的荧光定量PCR法、RFLP法和DNA测序法等，存在灵敏度低，样品易污染、假阳性率高的缺点，同时由于检测通量的局限性，不能满足实际应用的需要。而染色体9p21区段SNP位点，目前国内外几乎没有相关的检测产品。 

发明内容

本发明的目的之一是提供KIF6基因SNP检测液相芯片，该液相芯片可用于检测KIF6基因T2155C(rs20455)的野生型和突变型。 

实现上述目的的技术方案如下： 

一种KIF6基因SNP检测液相芯片，主要包括有： 

(A)针对KIF6基因的T2155C SNP位点设计的野生型和突变型的ASPE引物对，每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对T2155C SNP位点的特异性引物组成，所述特异性引物是：SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.18；