[发明专利]一种复方免疫佐剂及疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种复方免疫佐剂及含有该免疫佐剂的疫苗。

背景技术

抗原单独免疫时，不足以产生免疫原性，特别是高纯度的抗原(如多肽)。因此，需要用不同种类的佐剂来增强抗原所诱导的免疫应答。加入了佐剂，能够减少疫苗中抗原的数量或强化次数或延长疫苗的保护时间。

Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)是近年来发现的一类新的细胞表面的天然免疫受体，它能够特异性地识别侵入的病原微生物，通过偶联信号转导途径，激活天然免疫细胞，最终引起一系列的炎症反应。TLRs不仅能激活天然免疫系统，而且也为激活获得性免疫提供共刺激信号。TLRs受体激动剂可以最大化的活化树突状细胞，提高抗原识别和递呈的能力，显著提高机体细胞免疫水平。

现有技术中，咪喹莫特、CpG均能够刺激Th1免疫反应的活性，而白油具有刺激Th2免疫反应的活性。咪喹莫特为Toll样受体7/8激动剂，CpG为Toll样受体9激动剂，它们具有刺激机体免疫的活性，尤其是提高细胞免疫反应的性能。咪喹莫特或CpG单独使用，可以增强某些抗原的细胞免疫反应，刺激细胞因子的分泌，在以细胞免疫为主的疾病的预防方面已有研究，如用于艾滋病疫苗。咪喹莫特与R-848(Toll样受体4激动剂)的配伍使用，显著提高Th1免疫反应。CpG可以与蛋白质抗原、多肽抗原制备疫苗，显著提高疫苗的细胞免疫活性，CpG佐剂目前仅为单独使用，应用于癌症疫苗的研究。白油佐剂一方面可以作为抗原库，保护抗原不会被机体迅速降解，让抗原缓慢释放，达到持续刺激的目的，另一方面也具有刺激Th2免疫反应的活性，提高抗体的产生。然而，目前现有技术中的佐剂往往只单独刺激Th1或Th2免疫反应，综合佐剂效应还不够理想，特进行此发明的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种复方免疫佐剂，以通过复方组分的协同作用，同时提高Th1和Th2免疫反应的活性。本发明还提供一种含有该免疫佐剂的疫苗。

本发明提供一种复方免疫佐剂，包括分别配制的水相溶液和油相溶液，所说的水相溶液是浓度为0.5～2.0mg/m L的CpG水溶液(即每mL水中加入0.5～2.0mg的CpG)；所说的油相溶液是浓度为0.25～1.0mg/mL的咪喹莫特白油溶液(即每mL白油中加入0.25～1.0mg的咪喹莫特)；水相溶液与油相溶液的体积比为1∶6。

所说的油相溶液含有Span-80，Span-80在油相溶液中的体积百分含量为6％。

所说的油相溶液含有硬脂酸铝，硬脂酸铝在油相溶液中的体积百分含量为2％。

所说的水相溶液含有吐温-80，吐温-80在水相溶液中的体积百分含量为4％。

其中，咪喹莫特是咪唑并喹啉胺衍生物，其化学名为：1-(2-甲基丙基)-4-氨基-1H-咪唑并[4，5-C]喹啉或1-异丁基-1H-咪唑[4.5-C]喹啉-4-胺基。其化学结构式如下：

分子式：C₁₄H₁₆N₄，分子量：240.31。可通过纯化学合成获得，因此保证了制药应用所必须的再现性和安全性。

CpG的序列如下：5’-GTTCCTGAC TTGGTGCATCGATG CAGGGGGGTCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTTGGGGGGTCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTTGGGGGGTCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTTGGGGGGGCTAGACGTTAGCGT-3’，共137bp。可通过纯化学合成获得或者生物表达获得，因此保证了制药应用所必须的再现性和安全性。白油已商品化多年，来源和安全性均可得到保证。

本发明还提供一种的疫苗，包含有抗原和上述复方免疫佐剂，所说的抗原选自减毒的活的全微生物、灭活微生物、重组肽和蛋白、合成肽、裂解微生物中的一种或一种以上；抗原与所说的复方免疫佐剂中的水相溶液和油相溶液的体积比依次为：抗原∶水相溶液∶油相溶液＝1∶1∶6。

本发明提供的复方免疫佐剂同时包含咪喹莫特、CpG和白油，这些组份复配后，使佐剂刺激免疫细胞的活性显著提高，增强Th1和Th2免疫活性反应，并加快抗体的产生、增加抗体效价高水平的维持期，具有显著的协同效应。该佐剂制成的疫苗，不仅可以显著提高体液免疫反应，也能提高细胞免疫反应，佐剂效应明显、确实。

具体实施方式