[发明专利]以ICAM-1为检测指标的胎膜早破检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医用试剂盒领域，特别涉及一种用于检测妊娠期妇女胎膜早破(PrematureRupture of Fetal Membrane，简称PROM)的夹心酶联免疫吸附测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

胎膜破裂(Rupture of Fetal Membrane，简称ROM)可能在孕期随时发生，在临产前发生的胎膜破裂称为胎膜早破(PROM)。足月后(37孕周)PROM发生率约为10％；足月前(37孕周前)PROM的发生率为2-3.5％。胎膜早破是引起产科病人产前、产后并发症的主要因素，是导致胎儿早产和新生儿必须入住重症监护室的主要原因。由于医务人员不得不在延长孕周与宫内及孕妇感染的风险和胎儿肺发育问题之间求平衡，因而对胎膜早破患者的管理成本高、难度大，准确及时诊断孕妇是否发生胎膜早破至关重要。

现有技术中，采用金标准是诊断胎膜早破的一种准确方法，即在孕妇羊膜腔内注入染料(如美蓝)，若阴道内有被染料着色的液体流出即可诊断为胎膜早破，但采用金标准检测临床很难操作，并且造成患者的痛苦，故临床很少使用。临床上通常采用询问病史、患者自诉阴道有羊水流出、阴道分泌物pH值变为偏碱性(正常阴道分泌物pH为4.5～5.5)、显微镜下查见阴道分泌物涂片中出现羊水结晶等方法，这些方法虽然操作简单，但准确性、敏感性均较低。

细胞间黏附分子-1(Intercellular Adhesion Molecule 1，简称ICAM-1，权利要求书和说明书中，以“ICAM-1”表示细胞间黏附分子-1)属于黏附分子的免疫球蛋白超家族，是分子量76kD～114kD的单链糖蛋白。ICAM-1广泛表达在机体的血管内皮细胞、胸腺上皮细胞和其他种类的上皮细胞等非血源性细胞的表面，T淋巴细胞、B淋巴细胞和树突状细胞等血源性细胞的表面，以及成纤维细胞的表面，与淋巴细胞的浸润有关。虽然在妊娠晚期(孕周28-40)，受胎膜和羊水中的单核细胞上ICAM-1的表达和中性粒细胞活化的影响，妊娠妇女的羊水中ICAM-1水平升高，但目前尚未发现以ICAM-1为检测指标的胎膜早破检测试剂盒及其制备方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以ICAM-1为检测指标的胎膜早破检测试剂盒及其制备方法，以提高胎膜早破检测的准确性，减轻患者的痛苦。

本专利申请的发明人通过实验发现：ICAM-1是妊娠晚期出现在羊水中的主要蛋白质之一，含量为13.08±6.1lng/mL。胎膜早破时将有羊水从羊膜腔中渗漏至阴道，羊水中的ICAM-1则会出现在阴道分泌物/宫颈粘液(Cervical-Vaginal Fluid，CVF)中。蛋白芯片筛选实验发现：确诊的PROM产妇与确诊的非PROM产妇相比(两组产妇的年龄与妊娠周龄匹配，无基础疾病，无妊娠合并症)，阴道分泌物/宫颈黏液样本中ICAM-1的浓度具有明显差异。因此，可将ICAM-1作为胎膜早破的检测指标。

本发明所述以ICAM-1为检测指标的胎膜早破检测试剂盒，包括包被有ICAM-1单克隆抗体的多孔板、生物素标记的ICAM-1单克隆抗体(Biotin-ICAM-1Ab)检测液、与生物素标记的ICAM-1单克隆抗体(Biotin-ICAM-lAb)结合的亲和素-辣根过氧化物酶、显色底物3′，3′，5，5′-四甲基联苯胺和ICAM-1蛋白标准品。

实验表明，上述试剂盒所含包被有ICAM-1单克隆抗体的多孔板，优选每孔包被ICAM-1单克隆抗体0.9μg～1μg。

上述试剂盒中，所述生物素标记的ICAM-1单克隆抗体(Biotin-ICAM-1Ab)检测液主要由生物素标记的ICAM-1单克隆抗体(Biotin-ICAM-1Ab)、牛血清白蛋白、甘油和磷酸盐缓冲液组成，生物素标记的ICAM-1单克隆抗体(Biotin-ICAM-1Ab)的浓度为24mg/ml，牛血清白蛋白的浓度为1.5g～3g/100ml，甘油的浓度为50ml/100ml。

所述生物素标记的ICAM-1单克隆抗体(Biotin-ICAM-1Ab)由生物素酰-N羟基丁二酰亚胺酯和ICAM-1单克隆抗体耦联而成，酰-N羟基丁二酰亚胺酯与ICAM-1单克隆抗体的质量比为0.5～1∶7。

为了方便用户使用，本发明所述试剂盒还可配备样本稀释液，所述样本稀释液是在浓度0.01mol/L～0.02mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)或浓度0.01mol/L～0.02mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液(Tris缓冲液，TBS)中加入牛血清白蛋白配制而成，牛血清白蛋白的浓度为1g～2g/100ml。