[发明专利]一种适合三种宿主系统的表达载体

权利要求书

1.一种适合三种宿主系统的表达载体，其特征在于，含有大肠杆菌，昆虫细胞和哺乳动物细胞表达元件，将重组蛋白编码序列克隆至此载体，能在上述三种宿主系统中表达重组蛋白；该表达载体还含有bacmid穿梭质粒转座特异元件。

2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述哺乳动物细胞表达元件含有启动子，该启动子是经改进的人巨细胞病毒早期启动子，其序列如SEQ IDNO.1所示。

3.如权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述哺乳动物细胞表达元件含有一个内含子，其序列如SEQ ID NO.2所示。

4.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述大肠杆菌启动子是T7lac，其序列如SEQ ID NO.3所示。

5.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述昆虫细胞启动子是polyhedrin promoter，其序列如SEQ ID NO.4所示。

6.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述昆虫细胞启动子位于大肠杆菌启动子下游，该昆虫细胞启动子的序列如SEQ ID NO.5所示。

7.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述大肠杆菌启动子和昆虫细胞杆状病毒表达启动子位于所述内含子内部。

8.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述bacmid转座特异元件为Tn7L，Tn7R，Tn7R的序列如SEQ ID NO.7所示，Tn7L的序列如SEQ ID NO.8所示。

9.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，该表达载体还含有病毒复制起点。

10.如权利要求9所述的表达载体，其特征在于，所述病毒复制起点为EBVOriP，其序列如SEQ ID NO.6所示，所述哺乳动物细胞含有EBNA-1蛋白。

11.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体在大肠杆菌中进行表达时，采用质粒直接转化的方法，使用IPTG或半乳糖进行诱导表达，该大肠杆菌采用BL21菌株。

12.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体在昆虫细胞中进行表达时，首先要将其与bacmid穿梭质粒进行转座，将表达框架转座到bacmid上，获得的bacmid转染昆虫细胞获得杆状病毒，病毒感染昆虫细胞表达重组蛋白，该昆虫细胞采用昆虫细胞sf9。

13.如权利要求12所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体在哺乳动物细胞中进行表达时，可使用所述昆虫杆状病毒感染哺乳动物细胞，该病毒感染后不能产生新的病毒，但由于EBV OriP复制起点的存在，病毒DNA可以以附加体的形式进行复制，表达质粒也可以以瞬时转染的形式表达重组蛋白，由于EBV OriP复制起点的存在，质粒也可以以附加体的形式进行复制；该哺乳动物细胞采用细胞293-EBNA。

14.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为载体pNP3P，其序列如SEQ ID NO.10所示。