[发明专利]高灵敏检测重金属汞的生物传感器细胞及其制造方法无效
| 申请号： | 201010185545.6 | 申请日： | 2010-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN102250819A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 王钦宏;方向东 | 申请（专利权）人： | 天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12Q1/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300308 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 灵敏 检测 重金属 生物 传感器 细胞 及其 制造 方法 | ||
1.检测水溶性样品中汞污染的生物传感器细胞及其生物制造方法，所述制造方法包括如下：
2.按权利要求1，通过用金属调节蛋白MerR基因(包括启动子区域)和红色荧光蛋白mCherry基因组成汞离子诱导的基因表达系统并导入宿主菌大肠杆菌中得到生物传感器细胞。该传感器细胞可以专一性地在15-40℃，pH4-9条件下在0.5-8小时内检测1-5000nM无机二价汞离子污染溶液。
3.按权利要求2，在MerR基因和mCherry基因组成汞离子诱导的基因表达系统中引入甲基汞裂解酶基因MerB后所得生物传感器细胞可以专一性地在15-40℃，pH4-9条件下在0.5-8小时内检测1-300nM甲基汞污染溶液。
4.按权利要求2，在MerR基因和mCherry基因组成汞离子诱导的基因表达系统中引入汞离子运输蛋白基因MerT后所得生物传感器细胞。该传感器细胞可以专一性地在15-40℃，pH4-9条件下在0.5-8小时内检测1-5000nM无机二价汞离子污染溶液。
5.按权利要求2，在MerR基因和mCherry基因组成汞离子诱导的基因表达系统中引入由来源于细菌λ噬菌体PRM-cI和MerR组成的基因级联放大系统后所得生物传感器细胞。该传感器细胞可以专一性地在15-40℃，pH4-9条件下在0.5-8小时内检测1-5000nM无机二价汞离子污染溶液。
6.按权利要求1，由MerR基因，mCherry基因和来源于恶臭假单胞菌的Pm-XylS2组成新型基因级联放大系统并导入宿主菌大肠杆菌中得到生物传感器细胞。该传感器细胞可以专一性地在15-40℃，pH4-9条件下在0.5-8小时内检测1-5000nM无机二价汞离子污染溶液。
7.按权利要求2，通过蛋白质定向进化和高通量筛选技术得到23中MerR突变体：S131L，S125P，S125T，V124D，V124T，V109E，V109M，M106T，M106V，K99N，K99Q，K99T，S86C，T80S，E77K，L74Q，L74V，E72K，S66C，F56L，F53Q，A16V，K15E，由这些金属调节蛋白MerR突变基因分别和mCherry基因组成汞离子诱导的基因表达系统并导入宿主菌大肠杆菌中得到不同生物传感器细胞。这些传感器细胞可以专一性地在15-40℃，pH4-9条件下在0.5-8小时内检测0.1-5000nM无机二价汞离子污染溶液。
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