[发明专利]用原核表达系统制备铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF的方法无效
| 申请号： | 201010184859.4 | 申请日： | 2010-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN101831440A | 公开（公告）日： | 2010-09-15 |
| 发明（设计）人： | 胡成进;王燕 | 申请（专利权）人： | 胡成进 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/70;C07K14/21 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 张贵宾 |
| 地址： | 250031 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用原核 表达 系统 制备 铜绿 假单胞菌外 膜蛋白 oprf 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种用原核表达系统制备铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF的方法，其特征在于：主要包括如下步骤：
(1)从铜绿假单胞菌中提取基因组DNA，以此为目的基因通过PRC扩增OprF羧基端，并将其克隆至原核表达载体pET28b中，构建重组表达载体pET28b-OprF；
(2)重组质粒经酶切和序列测定后，转化E.coli BL21，IPTG诱导表达，进行SDS-PAGE检测；
(3)经Ni-NTA亲和层析柱纯化后得到元和表达的OprF蛋白。
2.根据权利要求1所述的用原核表达系统制备铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF的方法，其特征在于：所述扩增OprF羧基端采用的引物为上游引物5’-TCGAAGCTTGCTCCGGCTCCGGAAC CGGTTGCCG AC-3’(HindIII)和下游引物5’-ACCTCGAGTTCAA CGCGACGGTT GA AGCGCG-3’(XholI)。
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