[发明专利]一株苏云金芽孢杆菌的分离纯化及其驯化方法与用途

权利要求书

1.一株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)ODPY的分离纯化及驯化方法，其特征在于：

A、在无菌条件下，将生产农药恶草酮废水处理池的污泥加水混匀后静止0.5～2h，取上层清液1mL，用0.8％的生理盐水梯度稀释10^-1～10^-8，得到8份稀释菌液；

B、在无菌工作台上，取8个平板，向每个平板注入融化后降温至约40～50℃的牛肉膏蛋白胨固体培养基15～20mL，待凝固；

C、取A中已稀释好的菌液各0.1～0.2mL分别用灭过菌的三角涂布棒均匀涂布到8只平板上，并依次编号；

D、将上述已制备好的8个平板置于30℃的培养箱中培养18～60h；

E、从各个平板中挑取形态较清晰的单菌落，按编号，依次置放到另外8只平板上已凝固的牛肉膏蛋白胨固体培养基上并划线，将划过线的平板置于30℃的培养箱中培养18～60h，此过程至少重复两次。

F、将纯化后的菌株按5％～10％(W/V)的接入量接种于无机盐培养基中，最大浓度为100mg/L。于25～35℃、120～170rpm摇床中驯化培养，每隔5～10d按5％～10％的接种量接种于新的培养基，驯化时间不少于2个月。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分离纯化固体培养基配方：NaCl 2～7g、蛋白胨9～12g、牛肉膏2～5g、琼脂10～30g、水1000mL，pH值为6.0～9.0。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的无机盐液体培养基配方：每1000mL水中含K₂HPO₄ 4～8g、KH₂PO₄ 0.2～0.8g、MgSO₄ 0.2～0.6g、(NH₄)₂8O₄ 1～5g、MnSO₄·H₂O0.04～0.08g、FeSO₄·7H₂O 0.008～0.02g、CaCl₂ 0.01～0.03g、硫酸铵0.1g、恶草酮0.1g。

4.一种苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)ODPY的用途，其特征在于：在生化治理有机废水中的应用。

5.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)ODPY的用途，其特征在于：在生化治理高盐度有机废水中的应用。

6.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)ODPY的用途，其特征在于：在农药恶草酮生产有机废水中的应用。

7.根据权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)ODPY的用途，其特征在于：在生化治理含氯仿、甲苯、芳香族化合物难降解有机污染物废水中的应用。