[发明专利]一种从生物体中提取GP4G的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取生物体中活性物质的方法，特别涉及一种从生物体中提取GP4G(四磷酸二鸟苷)的方法。

背景技术

GP4G(P¹，P⁴-Di(guanosine 5′)tetraphosphate)，化学名为四磷酸二鸟苷，在化妆界被称为细胞活化再生素，能渗透至真皮层，具有活化肌肤，帮助修复受损细胞，加强细胞的再生功能，让细胞之间的养分疏通效率更高；促进胶原蛋白成分合成，提升细胞整体活力，延缓皱纹产生，改善和淡化皱纹，帮助肌肤恢复紧致与弹性。在化妆品行业具有广阔的市场前景。

目前有报道的关于GP4G的提取方法见于F.J.FINAMORE和A.H.WARNER于1963年在The Journal of Biological Chemistry发表的文章The occurrence of P¹，P⁴-Diguanosine 5′-Tetraphosphate inBrine shrimp eggs。但是根据此文献报道的提取GP4G的方法，其GP4G的收率低，设备要求条件高，生产成本高，不利于工业化生产。

发明内容

鉴于此，本发明的目的是提供一种从生物体中提取GP4G的方法，与文献中方法相比，具有收率高、生产成本低，有利于工业化生产的特点。

本发明采用以下的技术方案：用含有GP4G的生物材料作为原材料，进行以下步骤的操作：

原料预处理：称取1000kg～2000kg生物原材料，用100～200目的筛网进行筛选，去除杂物，再进行清洗；

脱水：将处理后的生物原材料放置到设有100～200目筛网的传送机上进行脱水，并以0.5m/min～2m/min的速度传送；

破碎：将脱水后的生物原材料进行破碎；

浸取：将破碎后的生物原材料的折纯干重与1mol/L～3mol/L的-10℃～20℃的酸性溶液按1∶1～10kg∶L的比例混合，充分搅拌30min～120min，分离上清液；

中和：真空浓缩1～10倍后，用2mol/L～5mol/L碱性溶液调整浸取后的上清液pH至7～8，收集固体析出物，去除清液，将固体析出物按5％～30％浓度采用蒸馏水或去离子水溶解，再采用2mol/L～5mol/L酸性溶液调清液pH至2～5，准备上柱；

吸附：上述溶液用强酸性阳离子交换树脂进行吸附，吸附饱和后，注入脱盐水或去离子水进行压料；

洗脱：用0.5mol/L～2mol/L的酸性洗脱剂进行洗脱解吸，并分段收集目标产物；

脱盐：然后采用弱碱性阴离子交换树脂进行过流工艺脱色脱盐处理；

真空浓缩：在操作压力为-0.085MPa～-0.092MPa，温度为30℃～60℃的真空状态下，当溶液中GP4G的含量达到6％时，开始收集GP4G。

所述含有GP4G的生物材料为含高盐及含高矿物或耐高盐的海洋浮游生物及内陆湖里的壳类生物。优选为含高盐及含高矿物或耐高盐的卤虫或卤虫卵。

所述浸取步骤中用到的酸性溶液为HCl，HClO₄，H₂SO₄，HNO₃，HCOOH，CH₃COOH中的一种或几种。

所述浸取步骤中上清液的分离方法为虹吸、离心、过滤中的一种或几种方式。

所述中和步骤中所用到的碱性溶液为NaOH，KOH，氨水中的一种或几种。

所述洗脱步骤中的酸性洗脱剂为甲酸、乙酸、HCl、H₂SO₄中的一种或几种。

所述最终获得的GP4G产物为液态或固态，优选为液态。

在实际操作中，浸取过程中用到的酸性溶液中经常加入NaCl，(NH₄)₂SO₄，KCl等盐类用来加强浸取的效果；在第一次将上清液浸取完毕后，还有一些固体不溶物剩余，将这些固体不溶物和酸性溶液按1∶1～10的比例进行二次、三次浸取，后两次浸取液可依次作为下一批次的第一次、第二次浸取液进行使用，这样操作的好处可以降低溶剂用量和废水量，同时可以提高浸提收率和节省浸提时间。再将剩余的固体不溶物用板框过滤机，操作压力为10MPa～20MPa进行过滤处理，收集上清液，滤渣用于其他用途。

得到真空浓缩的GP4G后，可按最终产品不同的规格要求，分别作后续加工。