[发明专利]一种白首乌中单体化合物的分离纯化方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及从白首乌中分离纯化单体化合物bungeiside-A和bungeiside-B的方法。

(二)背景技术

白首乌为萝摩科鹅绒藤属植物白首乌(Radix Cynanchi bungei)的块根。主产于我国泰山，与紫草、黄精、四叶参并称为“泰山四大名药”，具有抗肿瘤、抗氧化、降血脂和免疫调节等作用(徐凌川，等.中医药学刊，2003，21(11)：1893；张如松，等.中草药，2000，31(8)：599；宋俊梅，等.食品科学，1997，18(9)：61；高丽君，等.中国中药杂志，2005，30(17)：352)。Lijun等研究表明白首乌的主要成分为戟叶牛皮消苷和苯乙酮类化合物(Li Jun，et al.Chem.Pharm.Bull.1992，40(12)：3133)。

目前国内外多采用柱层析法等传统方法分离纯化白首乌中的bungeiside-A和bungeiside-B等单体化合物，这类方法多使用大量的氯仿、甲醇等有毒的有机溶剂，而且柱层析法的不足之处是分离周期长，回收率低，分离效果不理想。另外，由于白首乌中各主要成分极性极为相近，通常无法在较短时间内使目标化合物得到有效的分离，需借助多次重复分离而造成目标化合物损失较多。

高速逆流色谱法(high speed counter-current chromatography，HSCCC)是一种新型液-液色谱分离方法。他不同于传统液相色谱法，该色谱法可以在短时间内实现高效分离和分析，具有无固体载体，可以避免分离样品与固体载体表面产生化学反应而变性和不可逆吸附等优点，而且对样品的预处理要求较低，适用于粗提取物的分离。因此，近年来，HSCCC在生物科学、医药和化工等领域广为运用，在植物天然活性成分的分离制备中更为突出，无论是一次制备的量，还是制备纯度均得到极大的提高。

高速逆流色谱是一种基于样品在两个互不混溶的溶剂之间分配作用的分离技术，是分离科学技术的一个新分支。该技术是一种不用固态吸附剂的全液态的色谱方法。由于不使用固态支撑体，与其它的色谱技术相比，HSCCC能够完全消除支撑体导致的样品不可逆吸附和对样品的沾染、失活、变性等影响，实现复杂混合物中各组分的高纯度分离。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种快速、高效分离白首乌中单体化合物bungeiside-A和bungeiside-B的新方法，即使用高速逆流色谱法从白首乌中分离制备单体化合物的方法。成品中采用高效液相色谱法测定bungeiside-A和bungeiside-B的纯度均达到98％以上。该方法分离条件温和，分离效率高，且分离时间短，能得到高纯度的bungeiside-A和bungeiside-B。

本发明提供一种从白首乌中分离纯化单体化合物bungeiside-A和bungeiside-B的方法，包括如下步骤：

(1)制备白首乌提取物：

取白首乌药材，样品经粉碎机粉碎，过40目筛。称取干燥的白首乌粉末，加入20倍重量的乙醇中，超声波提取30-60min，过滤；将滤渣重复上述步骤，再提取2次，合并滤液，减压浓缩至浸膏状，得白首乌提取物。

(2)提取物的进一步纯化：

将上述步骤制得的白首乌提取物加适量水混悬后，过大孔吸附树脂柱，使大孔树脂对提取液中的物质充分吸附：先用水溶液进行充分洗脱除去水溶性杂质，再用10％-20％乙醇溶液洗脱，收集10％-20％乙醇洗脱液，减压浓缩干燥，即得大孔树脂粗分离物。

(3)高速逆流色谱分离bungeiside-A和bungeiside-B：

a.溶剂系统和样品溶液的配制

在分液漏斗中配制正丁醇∶甲醇∶水(4∶1∶5，v/v)两相溶剂体系，充分振摇后在室温下静置过夜。使用前分别取分液漏斗中的上相(作为HSCCC的固定相)和下相(作为HSCCC的流动相)，超声脱气30-60min。取步骤(2)中的大孔树脂粗分离物，用相同体积的上相和下相溶解样品，备用。

b.高速逆流色谱分离制备过程

首先将溶剂系统的上相注入高速逆流色谱仪分离管中，待上相充满整个管路后调整主机转速850rpm/min，再以2.0mL/min流速泵入下相，待流动相从柱出口流出，两相在分离管中达到动态平衡后，由进样阀注入a中的样品溶液。在254nm波长下检测，记录色谱图，根据色谱图收集流分Ⅰ和Ⅱ。

c.bungeiside-A和bungeiside-B的分析和鉴定