[发明专利]麻疯树籽粕毒蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白分离和纯化领域，具体涉及一种制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法。

背景技术

肿瘤是严重危害人类健康的恶性疾病，我国每年死于肿瘤疾病的患者有100多万人，目前，已成为我国城市人口死亡的首要因素。抗肿瘤药物市场是仅次于心血管和中枢神经系统药物市场的全球第三大药物市场，目前发展迅速，2007年全球销售额为400亿美元，2010年预期将增至600亿美元，年增长率逾10％，在中国更是以17％的速度增长，而我国抗肿瘤药物市场的增速一直高于医药行业的增速，预计未来我国抗肿瘤行业复合增长率将为26％。尽管抗肿瘤药物的市场需求大，然而，大多数化疗药属合成化合物，靶向性和杀伤性差，筛选周期的长、耗资巨大、成功率极低、开发难度增加。同时，人们经受多次药害之后，加深了对化学合成药物毒副作用的认识，更加崇尚回归自然的抗肿瘤药物。可见，高选择性、高效、低毒的新型抗肿瘤药物的研发面临历史性的重大机遇。

生物毒素是自然进化的产物，其毒性远较非生物毒素强。其结构和种类多样，往往具有特异活性和高选择性。目前，生物毒素已成为抗肿瘤重要新药来源，如紫杉醇、长春碱等植物毒素表现出良好的抗肿瘤活性。

麻疯树(Jatropha curcas L.)也叫小桐子、膏桐，是我国南方山区民间应用的一种木本油料树种，其种子含油量丰富，达到种子重量的52％，种仁的60％。种子油的理化特性与柴油接近，是制备生物柴油的理想原料。

据了解，“十一五”期间，我国规划生物柴油原料林基地建设规模83.91万公顷，原料林全部进入结实期后，将形成年产生物柴油125万多吨的原料供应能力。目前，已有一些颇具实力的企业和国外大型能源企业，进入麻疯树生物柴油这一领域，在各地筹建起有相当规模的生物柴油生产企业，预计未来全国麻疯树种植面积至少可达3000万亩以上，到2017年将生产出麻疯树粕160Mt(核仁完全脱脂后粗蛋白含量达53％～63％，其中含90％的真蛋白)。

麻疯树籽粕毒蛋白curcin是一种核糖体失活蛋白(RIPs)，已有研究报道，麻疯树籽粕毒蛋白curcin也是一种生物毒素，其占麻疯树籽粕总蛋白的1.5％～3％左右。把疯树籽粕毒蛋白curcin作为导向药物制备免疫毒素并将它应用到肿瘤治疗方面，将是麻疯树籽粕毒蛋白curcin研究的热点。因此，随着对麻疯树籽粕毒蛋白curcin抗肿瘤活性研究的不断深入，麻疯树籽粕毒蛋白curcin将成为人类向肿瘤挑战的有力武器之一，具有无限的发展前景。

但是，目前制备麻疯树籽粕毒蛋白curcin主要在实验室的微量、耗时及费用高的提取阶段，不能满足大规模的工业化生产要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，能够对麻疯树籽粕资源进行精深加工和综合利用开发，其规模大、耗时短、成本低。

本发明提供一种制备麻疯树籽粕毒蛋白的方法，包括如下步骤：

(1)将晒干的麻疯树籽进行粉碎，获得粉碎的麻疯树籽粕，其粉碎粒径为100μm～600μm。

(2)将粉碎的麻疯树籽粕挤压膨化预处理后，用正己烷进行脱脂，获得脱脂麻疯树籽粕。

(3)采用复合植物水解酶对脱脂麻疯树籽粕进行酶解，获得的产物采用高温淀粉酶进行酶解，然后离心取得沉淀。

(4)按照固液质量比为1∶5～1∶30向步骤(3)所述沉淀中加入蛋白复合提取剂进行提取，除去残渣后获得麻疯树籽粕毒蛋白粗提液。

(5)麻疯树籽粕毒蛋白粗提液分别通过截留分子量为30kDa和浓缩膜分子量为20kDa的超滤膜，获得分子量小于30kDa大于20kDa浓缩液，然后经脱盐柱脱盐、脱色后冷冻干燥得到麻疯树籽粕毒蛋白。

步骤(3)中所述复合植物水解酶的酶解条件为：复合植物水解酶的加入量为所述脱脂麻疯树籽粕质量的2％～5％，酶解温度40℃～65℃，酶解的pH为4～6，酶解时间1h～3h。所述高温淀粉酶酶解条件为：高温淀粉酶的加入量为脱脂麻疯树籽粕质量的1％～4％，酶解温度80℃～95℃，酶解的pH为5.5～7.5，酶解时间1h～3h。最好是，所述植物复合水解酶与高温淀粉酶的总质量为脱脂麻疯树籽粕质量的2.5％，所述植物复合水解酶与高温淀粉酶质量比2∶1；植物复合水解酶酶解时间2h，酶解温度为50℃，酶解pH为4.5；高温淀粉酶酶解时间1h，酶解温度为90℃，pH为7.0。