[发明专利]一种驴皮胶原的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于胶原的制备技术领域，特别涉及一种驴皮胶原的制备方法。

背景技术

胶原是动物体内含量最多、分布最广的一类蛋白质家族，广泛存在于从低等脊椎动物到哺乳动物的一切组织中；具有其他合成材料无法比拟的生物相容性、可生物降解性以及生物活性。现已至少发现了30余种胶原链的编码基因，可以形成16种以上的胶原分子。根据它们在体内的分布和功能特点，目前将胶原分成间质胶原、基底膜胶原和细胞外周胶原，间质型胶原分子占整个机体胶原的绝大部分，包括I型、Ⅱ型、Ⅲ型胶原分子，其主要分布于皮肤、肌腱等组织；基底膜胶原通常是指Ⅳ型胶原．其主要分布于基底膜；细胞周胶原通常中指V型胶原，在结缔组织中大量存在。

近年来，养驴慢慢受到畜牧业人士的关注，因为，不仅驴肉本身具有较高的经济使用价值，驴皮还具有很高的药用价值，具有天然的补血、止血作用，是制作阿胶的主要原料。

驴皮生皮料是极其复杂的物质，基本上是由蛋白质和非蛋白质两大组分组成，其中，蛋白质占鲜皮的30%～35%。新剥下来的生皮pH值为6.8～7.8，在存放过程中随皮料的逐渐变质，pH值亦随之变化。组成生皮的蛋白质种类很多，皮料蛋白质分为纤维蛋白（结构蛋白）、非纤维蛋白（非结构蛋白）和酶等。纤维蛋白由胶原、角朊、弹性硬朊组成。胶原约占生皮总量（除皮下层）的29%，约占全部蛋白质总量的88%。

目前，驴皮的应用主要是作为熬制阿胶的重要原料。根据中国药典2005年版一部的记载，阿胶的制法如下：

将驴皮（马科动物驴EquusasinusL.的干燥皮或鲜皮）浸泡去毛，切块洗净，分次水煎，小组过，合并滤液，浓缩（可分别加入适量的黄酒、冰糖和豆油）至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。

上述简单的熬制方法，没有针对驴皮中所含胶原成分的特性进行选择性提取和精制，使阿胶中除含胶原外，还含有部分水解产生的赖氨酸、精氨酸、组氨酸等多种氨基酸，以及钙、硫等成分；并且阿胶的水溶性差，只能烊化服用，也不能作为化妆品等使用，其使用受到较大限制。

发明内容

本发明的主要目的是针对上述现有技术中存在的对驴皮的应用仅限于熬制阿胶，而阿胶中成分复杂、水溶性差，除作为口服药物外其它应用受到较大限制等问题，提供一种驴皮胶原的制备方法，以驴皮为原料，通过特定的提取和精制方法，得到水溶性好的驴皮胶原，不仅保留生物活性，与人肌体、皮肤同源性及相容性，并且具有生物可降解性和低抗原性等特点，能被水以任性比例稀释，可用于制备外科植入物和组织工程医疗产品，开发医药、医学试剂、及保健品等。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种驴皮胶原的制备方法，包括下述主要步骤：

（1）脱毛、脱脂：

以检验、检疫合格的鲜驴皮为原料，采用常规方法脱毛、脱脂后，再用水洗至中性，0℃以下冷冻保存备用；

由于胶原在常温及高温条件下容易变性失活，因而需要冷冻保存。

（2）碎皮、碱液浸泡：

取上述步骤（1）处理后备用的驴皮解冻，碎皮成20-40目的颗粒，加入pH为7.5-9.5（可优选为7.5-9.0）的氢氧化钠溶液，其加入量按照驴皮颗粒质量:氢氧化钠溶液体积=1g:(8-12)ml计算，浸泡软化48-96h；用去离子水冲洗至pH为6.0-7.0，得到中性驴皮颗粒；

发明人通过大量试验发现，由于驴皮的表皮结构紧密，不容易软化，需要先将其碎成一定细度的小颗粒，才有利于后续的软化处理，发明人通过大量试验证实，当颗粒粗于20目时，由于颗粒太粗，加入碱液后浸泡处理超过96h也难以全部软化；理论上，碎皮的颗粒越细越有利于软化，但由于鲜驴皮的理化特性，又很难将其碎成超过40目的更细的颗粒，因此，综合考虑，以20-40目为好；

进一步的，将碎至20-40目的驴皮颗粒放入适宜pH值的碱液中进行浸泡处理，可软化胶质，有利于提高后续步骤酶解的效率，但pH值过低或过高都不利于软化效果，大量试验证实，以pH为7.5-9.5的氢氧化钠溶液较好；而浸泡时间的选择，则与驴皮颗粒的细度及碱液的pH值等密切相关，互相影响，在驴皮颗粒为20-40目、pH为7.5-9.5范围内，浸泡时间通常在48-96h内可获得理想的软化效果；

通过本步骤特定条件的碎皮、碱液浸泡处理，可有效软化驴皮中的胶质，为后续酶解等步骤有效提取驴皮胶原提供必要的保证。

（3）低温酶解：