[发明专利]半滑舌鳎三倍体的诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鱼类的养殖方法，特别是涉及一种三倍体半滑舌鳎的生产方法，该技术属于海洋生物技术领域。

背景技术

半滑舌鳎味道鲜美、口感爽滑，是我国海水养殖业近年开发的养殖品种，具有很高的经济价值。但半滑舌鳎雌雄生长差异大，雌性明显快于雄性。雄性生长速度缓慢，经二年的培育也难达到商品鱼规格，养殖者常在半年后把雄鱼逐渐淘汰掉，而只留下雌鱼养殖到商品规格。因此，实际成活率相当于雌鱼的比例。人工育苗所获得的鱼苗中，雄性比例一般在60％以上，有时能多达到70％。50％以上的尾数在养殖半年以上后才被淘汰掉，使养殖成本大幅提高，养殖效益大幅度下降，严重地影响了养殖者的积极性。

为解决这些问题，研究者们进行了许多有益的尝试，主要集中在雌性单性化诱导及养殖环境的优化方面，但是至今没有明显的效果。但从国内外水产动物研究的趋势来看，三倍体技术是具有潜力的一种方法。三倍体水产动物由于具有不育性的特点，即性腺不能发育成熟或发育畸形，而不能繁殖后代，因此没有性成熟或繁殖方面的能量损耗，避免了繁殖阶段的生长停止或高死亡率。目前，三倍体水产动物在控制过度繁殖、加快生长速度等方面都显示了良好的效果。

因此根据半滑舌鳎的特性，开发一种诱导方法，获得三倍体半滑舌鳎，回避雄性生长速度缓慢的缺点，以改善半滑舌鳎的生长速度，提高其经济效益和社会效益是养殖业者的共同期盼。

发明内容

本发明旨在提供一种半滑舌鳎三倍体的诱导方法。

本发明的步骤为：

1)选取性腺成熟的半滑舌鳎雄鱼和雌鱼，分别采集精液和成熟卵子；

2)将精液与卵粒均匀混合，室温静置2min，加入海水进行人工受精；

3)三倍体获得：将受精后2-10min的受精卵转移至0-10℃海水浴中进行冷休克15-55min，抑制第二极体的形成及其排出，使染色体组加倍。

4)、解除休克将卵移至常温海水中孵化，按照普通半滑舌鳎苗种生产方法管理，培育半滑舌鳎三倍体鱼苗。

在步骤2)中，海水水温为20-25℃。

在步骤3)中，海水中起始冷休克的时间为受精后2-8min；冷休克持续时间为15-55min；冷休克温度为3-8℃。

在步骤4)中，海水孵化的温度为20-25℃。

更优选地，

步骤3)中，海水中起始冷休克的时间为受精后6-8min；冷休克持续时间为20-40min，冷休克温度为4-6℃；

步骤4)中，海水孵化的温度为22℃。

采用上述方法诱导，能够得到较高的诱导率。

本发明的进一步方案为：诱导得到三倍体半滑舌鳎后，利用染色体核型分析、流式细胞仪等技术测定上述鱼体的染色体倍数，鉴别、筛选出三倍体半滑舌鳎进行培育。

本发明的有益效果在于：

1.本发明通过利用低温休克方法进行诱导，并通过控制诱导持续时间，抑制第二极体释放，从而大大提高三倍体半滑舌鳎的诱导率，据实验统计，所获得的三倍体半滑舌鳎的人工诱导率可达80％以上。

2.本发明工艺简单，成本低，可操作性强，避免了化学方法进行诱导带来的污染。

3.采用本发明所述方法培育的三倍体半滑舌鳎，具有生长速度快、个体规格大、养殖成活率高，抗病能力强等优点，具有良好的经济效益和社会效益。

在半滑舌鳎三倍体诱导中，其中最优选的诱导条件为，

选取性腺成熟的半滑舌鳎雌鱼和雄鱼，分别采集成熟卵和精液，人工受精，受精后8min用4℃的海水浴冷休克处理30min，抑制第二极体排出，然后在22℃的海水中孵化，完成冷休克法的三倍体诱导。

采用该条件进行半滑舌鳎的三倍体诱导，实验结果表明，受精率＝34.1％，孵化率＝82.45％，三倍体率达88％。三倍体半滑舌鳎诱导中，孵化率较低影响了三倍体诱导率的进一步提高，即使在本发明的实验条件下，一般孵化率也只在50％左右，然而该条件下诱导，并不影响其孵化率。

附图说明

图1半滑舌鳎二倍体鱼苗细胞DNA荧光分布直方图

图2半滑舌鳎三倍体鱼苗细胞DNA荧光分布直方图

具体实施方式

以下实验例和实施例将对本发明做进一步的说明。

实验例1

半滑舌鳎三倍体的倍性鉴定

采用德国Partec公司Cystain DNA 1 step染液一步法染色，通过流式细胞仪测定细胞DNA含量来鉴定倍性。

1、组织细胞悬液制备及测定