[发明专利]可常温运输的高灵敏高特异性的基因诊断检测核心试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因诊断检测试剂，尤其是一种可常温运输的高灵敏高特异性的基因诊断检测核心试剂，属于基因诊断检测技术。 

背景技术

PCR技术，即聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍，这种迅速获取大量单一核酸片段的技术在分子生物学研究中具有举足轻重的意义，极大地推动了生命科学的研究进展。它不仅是DNA分析最常用的技术，而且在DNA重组与表达、基因结构分析和功能检测中具有重要的应用价值。 

PCR可以被认为是与发生在细胞内的DNA复制过程相似的技术，其结果都是以原来的DNA为模板产生新的互补DNA片段。细胞中DNA的复制是一个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。PCR是在试管中进行的DNA复制反应，基本原理与细胞内DNA复制相似，但反应体系相对较简单。 

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： 

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备； 

②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； 

③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在耐热DNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。 

重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 

基本的PCR须具备以下条件： 

1.要被复制的DNA模板(Template) 

2.界定复制范围两端的引物(Primers). 

3.耐热DNA聚合酶(Taq.Polymearse，pfu DNA Polymearse，taq plus DNApolymerase，fast taq DNA polymerase，等) 

4.合成的原料及水。 

PCR的反应包括三个主要步骤，分别是： 

1).Denaturation 

2).Annealing of primers，and 

3).Extension of primers。 

所谓Denaturing乃是将DNA加热变性，将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板.而Annealing则是令Primers于一定的温度下附着于模板DNA两端。最后在DNA聚合酶(e.g.Taq-polymerase)的作用下进行引物的延长(Extension of primers)及另一股的合成。 

荧光定量PCR