[发明专利]一种烟叶浸提液培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养基，尤其涉及一种培养烟碱降解微生物的烟叶浸提液培养基及其应用，属于微生物技术领域。

技术背景

烟碱是烟草中的生物碱，它对人的中枢神经有强烈的刺激和麻痹作用，少量使人兴奋，大量会引起眩晕、呕吐甚至中毒死亡。烟叶中烟碱含量过高，就会严重危害烟民的健康。另外烟碱也是一种环境有毒物质，在烟草制品的生产加工过程中会产生大量的固体、液体和气体废弃物，这些废弃物如果不加处理就投放到环境中，会严重破坏生态环境，危害人类健康。微生物法降解烟碱因具有针对性、快速有效性的优点，受到越来越多的重视。至今，国内外研究者已经从环境中分离了多种烟碱降解菌。

目前所报道的培养烟碱降解菌株的培养基成分复杂，例如添加Na₂HPO₄、KH₂PO₄、K₂SO₄、MgCl₂·6H₂O、MnCl₂·4H₂O、FeCl₃·6H₂O、CaCl₂等基础离子成分后，再添加一定含量的烟碱，不仅制备繁琐，而且烟碱价格昂贵，成本较高，因而迫切需要寻找简单廉价的替代培养基配方。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种简单廉价适合培养烟碱降解微生物的培养基及其应用。

发明概述

本发明所述的烟叶浸提液培养基中添加了烟叶浸提液，采用该培养基培养烟碱降解类微生物可以获得更大的生物量，而且该烟叶浸提液培养基不需要额外添加各种微量元素和无机盐，使该培养基配制简单、使用方便、成本低、适合工业化应用。

发明详述

一种烟叶浸提液，其特征在于，由如下步骤制得：

将烟叶碎片和水按照质量体积比10～80∶1的比例混合，煮沸25～35分钟，过滤除去沉淀，定容，即得烟叶浸提液；

所述的质量体积比单位为g/L。

经检测，烟叶碎片与水按照10∶1比例混合时，烟叶浸提液含有烟碱1.3～1.8g/L，烟叶碎片与水按照20∶1比例混合时，烟叶浸提液含有烟碱1.9～2.5g/L，烟叶碎片与水按照40∶1比例混合时，烟叶浸提液含有烟碱3.9～4.5g/L，烟叶碎片与水按照60∶1比例混合时，烟叶浸提液含有烟碱6.2～6.8g/L，烟叶碎片与水按照80∶1比例混合时，烟叶浸提液含有烟碱9.2～9.8g/L。

一种烟叶浸提液培养基，其特征在于，组分如下：

烟叶浸提液1L，牛肉膏3～5g、蛋白胨5～10g、NaCl 5～10g、琼脂18～22g，pH7.0～7.5。

优选的，烟叶浸提液培养基成分如下：烟叶浸提液1L，牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂20g，pH7.0～7.5，所述的烟叶浸提液由烟叶碎片与水按照20∶1的比例混合。

一种烟叶浸提液培养基，其特征在于，组分如下：

烟叶浸提液1L，葡萄糖3～7g、蛋白胨3～7g、酵母粉3～7g、琼脂18～22g，pH自然。

优选的，烟叶浸提液培养基成分如下：烟叶浸提液1L、葡萄糖3g、蛋白胨5g、酵母粉3g、琼脂20g，pH自然，所述的烟叶浸提液由烟叶碎片与水按照20∶1的比例混合。

一种烟叶浸提液培养基，其特征在于，组分如下：

烟叶浸提液1L，酵母粉0.5～1g，pH7.0～7.5或pH自然。当pH7.0～7.5时适合培养细菌类烟碱降解微生物，当pH为自然时适合培养真菌类烟碱降解微生物。

优选的，烟叶浸提液培养基成分如下：烟叶浸提液1L，酵母粉0.5g，pH7.0～7.5或pH自然，所述的烟叶浸提液由烟叶碎片与水按照20∶1或80∶1的比例混合。

本发明还提供上述烟叶浸提液培养基在培养烟碱降解微生物方面的应用。

优选的，所述烟碱降解微生物为：米曲霉(Aspergillus oryzae)CGMCC NO.3687、假单胞菌(Pseudomonas sp.)CCTCC NO.M207083、烟草假单胞菌(Pseudomonas nicotianae)CGMCC NO.0757、根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)CCTCC NO.M206131、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CGMCC NO.0674之一。

所述烟叶碎片可由普通卷烟厂获得。