[发明专利]环介导恒温扩增技术快速检测短凯伦藻的方法

权利要求书

1.一种环介导恒温扩增技术快速检测短凯伦藻的方法，包括：

(1)赤潮藻类的基因组DNA提取

(2)LAMP扩增引物

两条外引物：

Kb-2F31：5’ATGCCTGCTTCAGTGTCAA3’

Kb-2B31：5’GGGGAAGATAAGAGGCAAGG3’

两条内引物：

Kb-2FIP1：5’AATGCACAGACACGCACTGCTGTGCCACTGTCAACTTGTCAT3’

Kb-2BIP1：5’GCGCTCTTGATGCATACAGTGCGGCAACAGGTTACACAAGGT3’

(3)LAMP扩增反应体系

(4)LAMP扩增产物的检测。

2.根据权利要求1所述的一种环介导恒温扩增技术快速检短凯伦藻的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的LAMP扩增反应体系所用试剂为：2.5uL 10×buffer，两个内引物Kb-2FIP1和Kb-2BIP1的终浓度均为1.6μM，两个外引物Kb-2F31和Kb-2B31的终浓度均为0.2μM，其他还包括6mM MgSO4，0.6mM dNTP，0.6M Betaine(Sigma-Aldrich)，8U Bst DNA聚合酶，1μL DNA模板。

3.根据权利要求1所述的一种环介导恒温扩增技术快速检测短凯伦藻的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的LAMP扩增反应体系的反应条件为：反应温度65℃，反应时间60min，最后于85℃保持3min终止反应。

4.根据权利要求1所述的一种环介导恒温扩增技术快速检测短凯伦藻的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的LAMP扩增产物检测，反应管内可见到大量白色沉淀产生则呈阳性；或加2μL 100×SYBR Green I于反应管中，反应管呈现绿色为阳性，反应管内颜色不变的为阴性。