[发明专利]调味品中大肠菌群分离富集方法

说明书

技术领域

本发明涉及菌群的分离富集方法，特别涉及一种调味品中大肠菌群分离富集方法。

背景技术

在食品行业，大肠菌群的含量是一项重要的卫生指标。对于蚝油、黄豆酱等粘稠状调味品，由于蚝油、黄豆酱等调味品成分复杂，存在干扰菌体生理状态、影响检测结果的物质，因此，在检测前需要先进行菌体分离富集，以去除干扰物质。

目前，在对调味品的大肠菌群进行检测前，对大肠菌群的分离方法包括如下几种：一是在营养琼脂等培养材料上对菌体12小时培养，获得可见单菌落，然后分离菌体，该种方法的缺点是时间长，有些不可培养菌体难于获得；二是采用免疫学方法分析菌体，该方法受到食品物料性质等因素影响，对于食品中的痕量微生物难于分离，并且由于免疫学方法本身的不足，不能分离所有菌体；其他方法如简单的膜过滤方法易于受到食品中小颗粒物质的影响使分离比较困难；离心沉淀方法易于受到食品中胶体类物质的干扰，难于分离。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种调味品中大肠菌群分离富集方法，分离速度快、分离效果好。

为解决以上技术问题，本发明的技术方案是，一种调味品中大肠菌群分离富集方法，包括如下步骤：

1)取调味品样品；

2)将样品以无菌生理盐水稀释5～40倍，得到稀释溶液，加入助滤剂；

3)将稀释溶液以真空过滤法滤过28～32μm的一级滤膜；

4)取滤后液过0.2～0.45μm的二级滤膜；

5)用无菌生理盐水多次洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上。在此技术方案中，加入助滤剂，能够促进过滤、去除色素；通过一级过滤，去除大颗粒渣粒，通过二级过滤，去除干扰物去除小分子干扰物质，达到菌体分离富集。

其中，步骤3)中，一级滤膜的材质为聚丙烯、聚氯乙烯、纤维素酯类、聚碳酸酯类、聚四氟乙烯中的任一种。

其中，步骤4)中，二级滤膜的材质为聚丙烯、聚氯乙烯、纤维素酯类、聚碳酸酯类、聚四氟乙烯中的任一种。

其中，步骤5)中，洗涤次数为2～3次。

其中，步骤2)中，所述助滤剂为吐温-60或吐温-80，所述助滤剂占稀释溶液的重量百分比为千分之0.5～千分之2。

其中，步骤2)中，将样品利用无菌生理盐水稀释15～20倍。

其中，步骤3)中，所述一级滤膜的孔径为30μm。

其中，步骤4)中，所述二级滤膜的孔径为0.3～0.4μm。

其中，步骤5)中，所述无菌生理盐水的用量为20～50ml。

其中，所述调味品为蚝油或豆酱。

与现有技术相比，本发明的调味品中大肠菌群分离富集方法，采用分级过滤，逐级去除干扰物，同时添加助滤剂，对菌体友好，能够快速分离菌体并且不会影响大肠菌群的活性，保证蚝油、黄豆酱等调味品中大肠菌群的高效快速分离。

附图说明

图1是本发明调味品中大肠菌群分离富集方法的流程图。

具体实施方式

本发明的基本构思是，将蚝油、黄豆酱等调味品稀释并经多级过滤，同时添加助滤剂，使得大肠菌群快速富集、分离。下面结合附图和实施例对本发明进一步描述。

参见图1，图1是本发明调味品中大肠菌群分离富集方法的流程图。

本发明的调味品中大肠菌群分离富集方法包括如下步骤：

S1、取调味品样品；

S2、将样品以无菌生理盐水稀释5～40倍，得到稀释溶液，加入助滤剂；

S3、将稀释溶液以真空过滤法滤过28～32μm的一级滤膜；

S4、取滤后液过0.2～0.45μm的二级滤膜；

S5、用无菌生理盐水多次洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上。

下面，以6个具体实施例对本发明的调味品中大肠菌群分离富集方法进行说明。

实施例一

1)取蚝油为样品；

2)将蚝油样品加无菌生理盐水稀释5倍，得到稀释溶液，在稀释溶液中添加吐温-60，添加浓度为稀释溶液的千分之1；

3)将稀释溶液以真空过滤法滤过30μm的一级滤膜，该一级滤膜为聚丙烯滤膜；

4)取滤后液过0.2μm的二级滤膜，该二级滤膜为聚氯乙烯滤膜；

5)用无菌生理盐水洗涤二级滤膜两次，大肠菌体截留在二级滤膜上。

以上分离过程所需时间20分钟，最终截留在二极滤膜上的大肠菌体中干扰物较少，因此，本实施例的分离速度快、分离精度高。

实施例二

1)取黄豆酱为样品；