[发明专利]辅助鉴定番茄黄化曲叶病毒的特异引物对及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定番茄黄化曲叶病毒的特异引物对及其应用。

背景技术

番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)是属于菜豆金色花叶病毒属(Begomoviruses)的一种双生DNA病毒，通过“超级害虫”—烟粉虱传播，具有突发性和难以控制的特点。该病毒可以侵染茄科、豆科等多种植物，主要危害番茄、辣椒、茄子、甘蓝和黄瓜等蔬菜以及烟草等经济作物，特别是在番茄上危害更重。受害植物症状表现为生长缓慢、植株明显矮化；顶部叶片皱缩、叶周边向上卷曲，叶片变厚变小，叶片区域性黄化；坐果少，果实硬小，不能正常转色，丧失商品性；危害严重时不能开花坐果，造成绝产。

番茄黄曲叶病毒是近几年新传入我国的有害生物。1964年最早在以色列发生，之后迅速扩散到中东、地中海沿岸、东亚、南亚、非洲、欧洲、美国、中美洲、澳大利亚等众多国家和地区。2002年传入我国南方省份，2005年秋在广西番茄主产区大面积爆发，同年传入江浙一带，2007年传入河南和山东，2008年该病在全国多个省市发展蔓延，2009年该病在河北局部地区和山东寿光大爆发，发生面积10多万亩，番茄损失8万多亩。2009年夏秋季，TYLCV在北京郊区县陆续发生，北京地区主栽的粉色大果番茄品种大多对该病毒敏感，该病害遍及通州、大兴、顺义、平谷、密云、延庆、昌平、房山、怀柔、丰台、朝阳、海淀等区县；发病棚室一般病株率5-10％，重病棚室病株率20％左右，个别棚室发病率达90％以上，造成严重减产或绝收，且病情发展迅速呈蔓延趋势。从世界各国TYLCV病毒危害的历程来看，一旦出现，如未能采取有效防控措施，必将会成为北京设施农业发展中的主要障碍，需要给予高度重视。

针对于TYLCV病毒的发生和危害，如何准确快速高效地检测到该病毒的存在和发生，是蔬菜安全可持续生产的迫切需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定番茄黄化曲叶病毒的特异引物对及其应用。

本发明提供了序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对。

所述引物对可用于辅助鉴定番茄黄化曲叶病毒。

本发明提供了辅助鉴定番茄黄化曲叶病毒的方法，是以待测病毒的基因组DNA为模板，用所述引物对进行PCR扩增；如果得到543bp的DNA片段，待测病毒为候选的番茄黄化曲叶病毒；如果没有得到543bp的DNA片段，待测病毒为候选的非番茄黄化曲叶病毒。所述待测病毒具体可为番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)、番茄花叶病毒(ToMV)、番茄蕨叶病毒(CMV)或番茄丛矮病毒(ToBSV)。

所述引物对可用于制备辅助鉴定番茄黄化曲叶病毒的试剂盒。

本发明还保护一种辅助鉴定番茄黄化曲叶病毒的试剂盒，包括所述引物对。

所述引物对还可用于辅助鉴定番茄是否感染番茄黄化曲叶病毒。

本发明提供了辅助鉴定番茄是否感染番茄黄化曲叶病毒的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测番茄叶片的总DNA；

(2)以步骤(1)提取的总DNA为模板，用所述引物对进行PCR扩增；如果得到543bp的DNA片段，待测番茄感染了番茄黄化曲叶病毒；如果没有得到543bp的DNA片段，待测番茄未感染番茄黄化曲叶病毒。

所述番茄具体可为番茄品种M82或番茄品种CM。

所述引物对可用于番茄育种，也可用番茄中番茄黄化曲叶病毒的防控。

本发明提供了基于番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)特异区段核酸序列引物对，具有特异性好、灵敏度高的优点，可以从分子水平准确、快速、高效地检测植株中的TYLCV。

本发明的引物对和方法可以方便地应用到工厂化集中育苗的带毒性检测，确保蔬菜生产中使用无毒健壮苗；可以方便地应用于蔬菜大规模生产中植株发病情况的快速检测，指导对该病毒病的防控；可以方便地应用到抗病毒育种材料的鉴定筛选以及抗病毒品新品种的培育。这项技术将为TYLCV的综合防控和北京及全国的蔬菜安全可持续生产提供强有力的科技支撑。

附图说明

图1为实施例2的样本的电泳图；M：DL2000plus；1：TYLCV；2：ToMV；3：CMV；4：ToBSV；5：空白对照。

图2为实施例3的样本的电泳图。

图3为实施例4的样本的电泳图。

图4为实施例5的样本的电泳图。

具体实施方式