[发明专利]牙鲆优良品种的杂交育种方法

说明书

技术领域：

本发明属于水产养殖技术，是一种能在鱼类高产抗感染良种培育中应用的杂交育种方法。 

背景技术：

牙鲆(Paralichthys olivaceus)广泛分布于中国、日本以及韩国海域。是我国海水养殖鱼类的主导品种之一，在我国北方及东南沿海广泛进行工厂化养殖和网箱养殖，其产值在水产业中占有相当大的比重。目前国内牙鲆育苗厂家遍布山东、河北、辽宁、浙江、福建等沿海省市，特别是近几年牙鲆养殖业从山东逐渐扩展到福建，成为一个以北方为主、南方为辅的全国性海水鱼类养殖主导品种。近年来，国内牙鲆鱼苗的年产量约在4000万尾，成鱼养殖产量为30000吨以上，年产值20多亿元。但是，随着牙鲆养殖业的快速发展，一些问题相继出现，例如，近亲交配现象日趋严重，导致牙鲆种质退化、生长速度降低、抗病力下降，病害发生日趋严重。在苗种培育中白化病、肠道白浊、鳗弧菌病、纤毛虫感染等疾病严重影响了牙鲆苗种的正常培育，使牙鲆苗种养成率较低。每年由于病害造成鲆鲽鱼类养殖业经济损失20多个亿。同时，国内牙鲆育苗基地的亲鱼均存在野生亲鱼补充不及时，亲鱼老化、近亲交配等问题。由于近亲交配导致牙鲆生长速度减慢、繁殖性能和存活率降低；同时近交还能导致基因频率的变化和稀有基因的丢失，导致遗传多样性降低，损害育种的遗传基础（李思发等，2005）。生长变慢以及病害频发已成为限制我国牙鲆养殖业可持续发展的瓶颈因子。另外，牙鲆多代人工繁殖苗种的高温耐受力不强，夏天难以在南方的池塘和海上网箱度夏，也影响了牙鲆在东南沿海省市的进一步推广和养殖。因此，牙鲆养殖业的发展迫切需要培育高产抗病的优良品种。 

杂交是指不同种类之间或者同一种类的不同地理群体之间进行交配培育后代的方式。由于两个亲本之间在遗传距离上相差较远、因而杂交的后代，即杂交子一代在生长性能和抗病原微生物感染能力等方面通常优于双亲，这种现象就称为杂交优势。杂交育种是作物育种中最重要的方法之一，迄今为止，在一些粮食作物中已经通过不同种类杂交培育出了一些在生长性能上具有明显优势的杂交品种，例如杂交水稻和玉米等。而有关海水鱼类杂交品种培育及通过杂交技术提高生长和抗感染能力的研究，目前国内外尚未见报道。 

国内近几年在牙鲆遗传育种研究方面，主要开展了人工雌核发育培育单性苗种的研究工作（王新成等，1997；王晓清等，2006；杨景峰等2009），同时，还开展了一些分子标记筛选和遗传多样性评价、种质鉴定以及抗病相关MHC基因标记筛选等方面的研究工作，如邹曙明等（2000）采用RAPD技术对牙鲆和大菱鲆养殖群体遗传结构进行的检测分析；尤峰等（2001）采用同工酶技术对山东近海牙鲆和养殖牙鲆的遗传多样性进行了分析； Liu 等(2005a，b) 利用微卫星标记和AFLP技术评价牙鲆养殖群体和野生群体的遗传结构，表明养殖群体的遗传多样性具有一定程度的下降；陈微等（2005）开展了牙鲆微卫星标记筛选和遗传多样性的分子研究；张玉喜等（2006）分析了牙鲆抗病鱼和不抗病鱼的MHC基因多态性，初步筛选到抗病相关的MHC基因型。但有关通过不同国家来源的牙鲆进行杂交培育高产抗感染新品种的研究，目前尚未见报道。 

发明内容：

本发明的目的是为了建立高产抗感染杂交牙鲆新品种培育方法，为海水鲆鲽鱼类高产抗感染良种培育提供技术方法，解决海水鲆鲽鱼类缺乏高产抗感染优良品种培育方法的问题，为海水鱼类养殖业提供高产抗感染杂交优良品种培育的技术手段。 

本发明其技术内容如下：本发明建立了牙鲆高产杂交品种培育的技术方法，主要包括：一、杂交亲本的筛选；二、杂交；三、杂交苗种生长性能评定；四、杂交苗种抗感染能力测定。 

一、杂交亲本的筛选：包括：1、抗感染杂交亲本的筛选，2、快速生长杂交亲本的筛选； 

１、抗感染杂交亲本的筛选，为自然选择抗感染亲本： 

在每年夏季高温季节，调查牙鲆养殖场的鱼苗患病和存活情况，选择病害发生严重的池塘，收集池塘中因为水温高导致病原菌感染发病后存活下来的鱼苗，一般选择70-80%以上的鱼苗死亡、而只有约20-30%的鱼苗存活下来的鱼苗；将这些鱼苗培育成亲鱼，达到性成熟，作为杂交的牙鲆抗感染群体；抗感染群体的养殖和繁殖按照常规方法进行。 

2、快速生长杂交亲本的筛选：