[发明专利]一种松乌甲素的制备方法

说明书

技术领域    本发明涉及一种从植物中提取有效成分的方法，具体地说一种松乌甲素的制备方法。

背景技术    乌头属植物松潘乌头(Aconitum sungpanense Hand-Mazz)分布于甘肃、四川、青海省等地。民间用于治疗跌打损伤、风湿、类风湿性关节炎等引起的疼痛。其主要化学成分为多种生物碱，且以二萜生物碱为主。

对于松潘乌头总碱的提取方法、分离总碱中的二萜化合物的方法及操作过程已有报道(药学学报，松潘乌头二萜生物碱的研究，1988，23；兰州大学学报，松潘乌头中的二萜生物碱研究，1991，04)；这些方法都采用经典的化学法，主要适用于研究领域，而在产业化过程中就会遇到很多问题。申请号为2007100572049，授权公告号为CN100494181C的中国发明专利公开的一种从松潘乌头中提取查斯曼宁的方法，也属于纯化学法。这些单纯的化学方法提取步骤繁多，操作复杂，不能适用于大规模生产，对操作人员身体健康有害，存在产品纯度不高，生产成本高，以及环境污染等诸多问题。

发明内容    本发明要解决的技术问题在于提供一种松乌甲素的制备方法，该方法完全能适用企业产业化生产，操作简便，工作效率高，总生物碱提取得率高，根据需要提取不同纯度的松乌甲素，有利于操作人员身体健康。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：一种松乌甲素的制备方法，其特征在于，包括两大步骤：

第一，从松潘乌头提取总生物碱；

1.1取过60～80目标准筛的松潘乌头根粉300g，盛于5000～10000ml的细口瓶中，加入重量百分比浓度8～15％氨水300ml；

1.2用重量百分比浓度60～80％乙醇3000～6000ml作为提取溶剂，用超声波提取器超声浸提两次；第一次浸提后，倾出浸提液，补加800～1500ml提取溶剂，进行第二次浸提并倾出浸提液，合并两次所得浸提液；每次提取时间10～30min，提取温度50～75℃；

1.3将浸提液过滤，于旋转蒸发器将滤液浓缩，回收溶剂，用重量百分比浓度1～5％的盐酸萃取3次，合并萃取液；加氨水调pH值至7～11，氯仿萃取2～4次，回收溶剂后产生白色沉淀，静置过滤，干燥恒重得松潘乌头总生物碱；

第二，用高速逆流色谱(HSCCC)将总生物碱分离制备目标化合物松乌甲素；

2.1准备两相溶剂系统

将正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水，按照体积比为1∶2～2.3∶2～2.3∶1～1.2配比混合，

或将石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶水，按照体积比为17～19∶22～24∶17～20∶13～16配比混合，充分摇匀后，在室温下静置8～12h分层为上、下相，分离两相，上相作为固定相，下相作为流动相；

2.2准备松潘乌头总碱溶液

取松潘乌头总碱150～180mg溶于40～80mL的下相中，超声助溶15～30min，移入50mL～100mL的容量瓶中，加下相至刻度，摇匀得松潘乌头总碱溶液；

2.3高速逆流色谱分离松潘乌头总碱溶液制备较高含量的生物碱

以10mL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为700～900r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2mL/min的流速泵入流动相；当流动相从主机出口流出时，开始进松潘乌头总碱溶液，进样量为5mL，流速1mL/min，检测波长282nm，主机温度20～30℃；

进样前检测上样液，即进样松潘乌头总碱溶液中松乌甲素的含量，逆流出峰后每5mL收集—管并编号，用高效液相色谱(HPLC)检测每管中的松乌甲素含量；经第一次HSCCC粗分，获得松乌甲素含量79.1～83.5％的生物碱；

2.4高速逆流色谱分离生物碱制备高纯度松乌甲素

将第一次HSCCC粗分所获得的生物碱，溶于30～40mL的下相中，超声助溶15～30min，移入50mL的容量瓶中，加下相至50mL刻度，摇匀得生物碱溶液；

以10mL/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的转速为700～900r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2mL/min的流速泵入流动相；当流动相从主机出口流出时，开始进生物碱溶液，进样量为5mL，流速1mL/min，检测波长282nm，主机温度20～30℃；

逆流出峰后每5mL收集—管并编号，用高效液相色谱(HPLC)检测每管中的松乌甲素含量；最高纯度的松乌甲素达到99.65％。

本发明中使用的高效液相色谱(HPLC)分析条件：