[发明专利]内切-β-1,4-葡聚糖酶

权利要求书

1.根据酶命名法分类为EC 3.2.1.4的内切-β-1，4-葡聚糖酶活性的酶，且所述酶选自下列之一：

(a)SEQ ID NO：1的第1到2322位DNA序列编码的多肽；

(b)由培养的宿主细胞表达SEQ ID NO：1的序列而产生的多肽，所述培养在允许该酶得以产生的条件下进行；

(c)SEQ ID NO：2中第1到773位氨基酸序列的内切-β-1，4-葡聚糖酶；

(d)由(a)、(b)或(c)通过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸得到的多肽，其中所述多肽保持内切-β-1，4-葡聚糖酶活性。

(e)与SEQ ID NO：2中第1到773位氨基酸序列有至少98.5％的序列同一性的多肽，其中所述同一性通过GCG程序包中提供的GAP进行测定，应用的GAP创建罚分为3.0且GAP延伸罚分为0.1。

2.根据酶命名法分类为EC 3.2.1.4的内切-β-1，4-葡聚糖酶活性的酶，且所述酶为由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸为SEQ ID NO：1第1到2322位中显示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2的酶，该酶包含芽孢杆菌属种DSM 12648的内源多肽。

4.根据权利要求1到3任何一项的酶，所述酶在至少5.5-10.5的pH范围内具有活性。

5.编码权利要求1的内切-β-1，4-葡聚糖酶活性的多肽的分离的多核苷酸分子。

6.权利要求5的分离的多核苷酸分子，其编码SEQ ID NO：2中第1到773位所示的酶。

7.根据权利要求5的分离的多核苷酸分子，其中所述多核苷酸为DNA。

8.根据权利要求5或6的分离的多核苷酸分子，其是从原核生物分离的或是基于原核生物的DNA文库产生的。

9.根据权利要求8的分离的多核苷酸分子，其是从芽孢杆菌属的菌株分离的或是基于芽孢杆菌属的菌株的DNA文库产生的。

10.根据权利要求9的分离的多核苷酸分子，其是从芽孢杆菌属菌种DSM12648分离的或是基于芽孢杆菌属菌种DSM 12648的DNA文库产生的。

11.包含根据权利要求5到10任何一项的多核苷酸分子的多核苷酸构建体。

12.包含以下可操作连接的元件的表达载体：

转录启动子；

选自以下的DNA片段：(a)编码内切-β-1，4-葡聚糖酶活性的多肽且序列为SEQ ID NO：1第1到2322位核苷酸中所示核苷酸序列的多核苷酸分子；(b)由SEQ ID NO：2中的第1到773位氨基酸残基通过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸得到的编码内切-β-1，4-葡聚糖酶活性的多肽的多核苷酸分子；和(c)(a)或(b)的简并核苷酸序列；

以及转录终止子。

13.已经导入根据权利要求12的表达载体的培养细胞，其中该细胞表达由所述DNA片段编码的多肽。

14.根据权利要求13的细胞，该细胞为原核细胞，或者是编码内切-β-1，4-匍聚糖酶活性的多肽的DNA片段所来源的内源细胞。

15.根据权利要求14的细胞，其中细胞属于芽孢杆菌属菌株。

16.根据权利要求14或15的细胞，其中细胞属于地衣芽孢杆菌菌株。

17.根据权利要求14的细胞，其中细胞属于假单胞菌属菌株。

18.根据权利要求14的细胞，其中细胞属于链霉菌菌株。

19.根据权利要求14的细胞，其中细胞属于酵母菌株。

20.产生具有内切-β-1，4-葡聚糖酶活性的多肽的方法，所述方法包括培养已经导入根据权利要求12的表达载体的细胞，由此该细胞表达所述DNA片段编码的多肽；以及回收该多肽。

21.包含根据权利要求1的酶的酶组合物。