[发明专利]一种水溶性葡甘露聚糖的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药检测领域，特别提供了一种水溶性葡甘露聚糖的检测方法。

背景技术

多糖是一类由单糖单元组成、具有丰富结构多样性的特殊生物高分子，在生物体内，多糖以贮能高分子存在，或通过不同方式的超分子作用，形成组织结构大分子；此外，多糖作为某些生物转化识别(如活性和选择性)过程中的关键物质，已越来越深入地被人们所认识。众多有机体如植物、动物、真菌、海藻和微生物，可通过生物途径大量合成多糖。天然来源的多糖具有较好的生物相容性和可降解性，通过化学改性，可以获得功能更为广泛的多糖衍生物，在现代食品、化妆品、医药用品、工业用材料等方面应用广泛，代表性的如淀粉、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、魔芋葡甘聚糖、阿拉伯胶和西黄芪胶等及其化学改性衍生品。

葡甘露聚糖是一种常见的天然黏性多糖，其主链为D-甘露糖和D-葡萄糖组成，一般通过β1-4位糖苷键，并常有部分支链结构和乙酰基修饰。该类多糖分布较为广泛，主要在植物中发现，如魔芋多糖(konjac gel)、白及多糖(来自白及Bletilla striata)等，在微生物中也有发现。该类多糖常作为优良的天然食品增稠剂使用，同时在医药原料、药用载体和生物医学材料中的应用也有报道。

多糖类成分由于分子量大、结构复杂，即使均一多糖也具有微观非均一性，对多糖的定性定量检测存在一定难度。多糖分子量分布范围的表征和测定方法很多，主要有渗透压法、黏度法、光散射法和凝胶过滤法等，各种方法均需要具有相应设备，测得的分子量数据不尽相同。近年采用高效液相一凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定多糖分子量分布范围的方法和技术已很成熟，并被收载为药典标准方法之一。现有技术中，还常采用完全酸水解法分析多糖中的单糖组成，一般采用气相色谱法检测，但样品需经衍生化处理。

尽管多糖的国内外对多糖的检测方法较多，但对葡甘露聚糖的综合检测方法报道较少。现有文献多仅限于葡甘露聚糖的鉴定工作，不能直接应用于产品定性定量分析中。有报道采用光散射法和黏度法定性分析魔芋多糖的分子量，采用紫外法测定白及多糖的总含量。在文献“高效液相色谱法测定魔芋葡甘露聚糖”(华东理工大学学报，2002，28(4)：406-409)中报道了用高效液相色谱法和示差折光检测器，采用氨丙基改性硅胶色谱柱对魔芋葡甘露聚糖进行含量测定的方法，但该方法并没有把甘露糖和葡萄糖分离开。文献“高取代度水溶性高分子魔芋葡甘聚糖醋酸酯制备工艺的研究”(食品研究与开发，2006，(5)：49-51)曾报道了采用盐酸羟胺法测定魔芋葡甘聚糖乙酸酯的乙酰取代度。但测定葡甘露聚糖的纯度未见报道，采用HPLC法定量分析葡甘露聚糖的单糖组成和含量的方法未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种水溶性葡甘露聚糖的检测方法。

本发明是针对现有葡甘露聚糖产品缺乏全面评价的质量控制方法的现状而展开研究的。已报道的葡甘露聚糖检测方法较为简单、难以确定该多糖的纯度和单糖组成。通过对葡甘露聚糖结构特征和检测方法的系统研究，我们建立了实际可行的葡甘露聚糖质量分析方法，适用于检测葡甘露聚糖产品特性。

本发明提供了一种水溶性葡甘露聚糖的组合检测方法，所述葡甘露聚糖的检测由下述的方法步骤组成：

(1)采用高效凝胶渗透色谱法法对葡甘露聚糖同时进行分子量定性分析和纯度分析

色谱条件与系统适用性试验：采用高效液相系统，凝胶色谱柱，含水流动相，流速0.4-1.0mL/min，柱温20-40℃，示差或蒸发光散射检测器；

对照品溶液的配制：精密称取多糖系列对照品，用水配制成0.5-5.0mg/mL的系列对照品溶液；

样品溶液的配制：精密称取待测样品，用水配制成0.5-5.0mg/mL的待测样品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

(2)采用高效液相色谱法对葡甘露聚糖完全酸水解产物进行单糖组成和定量分析

色谱条件与系统适用性试验：采用高效液相系统，改性硅胶基质色谱柱，流动相为乙腈-水，流速0.8-1.0mL/min，柱温20-40℃℃，示差或蒸发光散射检测器；

对照品溶液的制备：精密称取甘露糖和葡萄糖对照品，用水配制成0.05-2.0mg/mL的系列对照品溶液；