[发明专利]抑制锌指蛋白ZBTB20的miRNA或其前体的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种抑制锌指蛋白ZBTB20的miRNA或其前体的应用。

背景技术

锌指蛋白作为转录调控因子活跃在基因调控领域，参与细胞发育、代谢等调控，与许多发育、代谢疾病及癌症发生息息相关。根据形成锌指结构域保守序列的不同，锌指蛋白主要分为Cys2His2、Cys4和Cys6三个亚型。其中，近几年发现的ZBTB20(Zinc finger and BTBdomain-containing protein 20)，属于经典Cys2His2型锌指蛋白分类下POK(含有BTB/POZdomain)蛋白家族，最初由德国cDNA联盟发现并克隆(GeneBank，accession numberAL050276)。2000年N.Tommerup等运用核放射及荧光原位杂交法将ZBTB20基因定位到3号染色体q13.2带上。ZBTB20与BCL-6高度同源，可能参与造血、癌症发生及免疫反应。利用ZBTB20基因敲除小鼠进行ZBTB20功能研究，发现ZBTB20作为一个关键的转录抑制子调节肝脏中甲胎蛋白AFP(肝癌重要指标之一)的表达。

microRNA(miRNA)是非编码小RNAs的一种，编码miRNA的基因首先由RNA聚合酶II转录生成初级转录本(pri-miRNA)，其发夹结构可被RNA酶III Drosha识别并剪切成为约70个核苷酸长度的发夹状前体miRNA(pre-miRNA)。前体miRNA在Exportin5的作用下从细胞核转运至细胞质中，再由另一种RNA酶11I Dicer加工处理成为长约22个核苷酸的成熟miRNA。

先前的研究均表明miRNA作为一种新的基因表达调控因子，能够通过序列特异性结合于靶基因mRNA的3’非翻译区(3’un-translated region，3’UTR)来负调控靶基因的表达，广泛参与机体内多种生理、病理过程。miRNA通过直接剪切mRNA或抑制mRNA翻译在转录后水平调节基因表达。miRNA的异常表达与恶性肿瘤发生发展过程密切相关，这一事实使越来越多的研究人员着眼于对肿瘤相关miRNA的筛选、靶基因的确定和具体作用机制的研究。预测的miRNA对其靶基因是否存在真正的调控作用还有待实验方法来证实。荧光报告载体实验是目前验证miRNA靶基因的常用方法，即将含有目的miRNA结合位点的靶基因mRNA 3’UTR片段克隆插人荧光素酶(luciferase)编码区的下游，构建荧光报告载体，有的学者用EGFP代替荧光素酶构建荧光报告分子，然后采用Western Blot的方法来检测荧光蛋白表达情况。

人类基因组总共表达约700个左右的miRNA，而锌指蛋白目前发现的Cys2His2型有700多个，假设miRNA作为一种上游的调控因子调控锌指蛋白的表达进而调控更广范围的基因的表达。但是，到目前为止，还没有出现抑制调控锌指蛋白ZBTB20表达的miRNA的报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种抑制锌指蛋白ZBTB20的miRNA或其前体的应用，可以作为诊断造血系统疾病如肝癌的分子标志物，同时可开发为miRNA小分子药物。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种miRNA或其前体的用途，用于作为诊断造血系统疾病的分子标志物，所述miRNA或其前体包含选自SEQ ID NO：1～7中的序列。

由于有证据显示ZBTB20是肝癌指标蛋白甲胎蛋白AFP的有效转录抑制子，肝癌病人血中甲胎蛋白含量明显升高，很可能是由于ZBTB20量的减少或其活性降低造成，本发明的miRNA或其前体与ZBTB20能发生特异结合，进而对ZBTB20进行上游抑制调控。因此，可以将本发明的miRNA或其前体作为诊断造血系统疾病的分子标志物，通过检测该miRNA或其前体的异常表达来诊断造血系统疾病。

在本发明的另一方面，还提供了一种miRNA或其前体的用途，用于制备治疗造血系统疾病的药物，所述miRNA或其前体包含选自SEQ ID NO：1～7中的序列。所述药物可以施用于因miRNA异常表达引起锌指蛋白ZBTB20调节失控、进而产生的造血系统疾病如肝癌、白血病、或淋巴瘤等。

优选的，所述miRNA选自SEQ ID NO：1～7中的序列，更优选的，所述miRNA选自SEQ IDNO：1～2中的序列。

优选的，所述miRNA前体选自SEQ ID NO：8～11中的序列，更优选的，所述miRNA前体为SEQID NO：8所示序列。