[发明专利]海洋微生物发酵生产低温纤维素酶的方法

权利要求书

1.一种海洋微生物发酵生产低温纤维素酶的方法，其包括以下步骤：

(1)将产生纤维素酶的海洋微生物逐级低温驯化，驯化温度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃，使其在低温环境中生长良好；

(2)按常规方法将低温驯化后的纤维素酶产生菌在18～24℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；

(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的3～9％接种量接入液体发酵培养基中，在18～24℃培养72～132h时，即微生物发酵生产低温纤维素酶结束；

(4)将(3)的发酵液在4,000～8,000rpm离心收集液体，收集到的液体即为粗酶液；

(5)根据不同需要和使用对象不同，将(4)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中菌种低温驯化培养基、液体种子培养基、产酶培养基分别为：

(1)菌种低温驯化培养基：马铃薯50.0～100.0g，新华滤纸粉5.0～8.0g，麸皮2.0～6.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸气灭菌30min。

(2)液体种子培养基：水稻秸秆粉3.0～5.0g，蛋白胨0.5～1.0g，Tween80 0.1～0.3g，(NH₄)₂SO₄ 0.8～1.2g，KH₂PO₄ 1.2～1.8g，尿素0.2～0.4g，MgSO₄ 0.2～0.3g，CaCl₂0.1～0.2g，ZnSO₄·7H₂O 1.2mg，MnSO₄·H₂O 1.6mg，CoCl₂ 1.8mg，自来水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸气灭菌30min。

(3)产酶培养基：水稻秸秆粉7.0～12.0g，麸皮1.0～5.0g，Tween80 0.1～0.4g，(NH₄)₂SO₄ 1.0～1.5g，KH₂PO₄ 1.4～2.0g，尿素0.2～0.6g，MgSO₄ 0.1～0.4g，CaCl₂0.2～0.3g，ZnSO₄·7H₂O 2.4mg，MnSO₄·H₂O 3.2mg，CoCl₂ 3.6mg，自来水1.0L，pH值6.0，121℃高压蒸气灭菌30min。