[发明专利]一种活性重组核糖核酸酶抑制剂的高效可溶性表达方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物工程领域，特别涉及重组核糖核酸酶抑制剂的原核表达。

背景技术：

核糖核酸酶抑制剂(RNase Inhibitor，RI)是一种分子量约为50KDa的蛋白分子，能够结合和抑制哺乳类胰核糖核酸酶(RNase)超家族的多种成员。

RI是一种胞浆蛋白，在许多哺乳动物组织中广泛存在。它通过与多种核糖核酸酶紧密结合形成1∶1的复合体，抑制这些核糖核酸酶的活性。尽管RNase超家族的一些成员的同源性有很大差异，RI与它们形成的复合物，其解离常数在0.5-200fM的水平(Lee FS，Shapiro R，Vallee BL.Tight-binding inhibition ofangiogenin and ribonuclease A by placental ribonuclease inhibitor.Biochemistry，1989，28：225-30；Shapiro R，Vallee BL.Interaction of human placental ribonucleasewith placental ribonuclease inhibitor.Biochemistry.1991；30：2246-2255)。RI与这些配体RNase的高亲和力，在自然界中极为罕见。

在一些分子生物学研究中，RI可用于防止核糖核酸酶污染可能引起的问题，如在mRNA反转录实验，无细胞的体外蛋白翻译实验，和其他涉及RNA研究的工作中。

天然核糖核酸酶抑制剂可从人胎盘中分离纯化(Blackburn P.Ribonucleaseinhibitor from human placenta：rapid purification and assay.J Biol Chem.1979；254：12484-7)，也可以从一些哺乳动物组织中提取纯化(Gribnau AA，Schoenmakers JG，van Kraaikamp M，Bloemendal H.High purification of the RNaseinhibitor from rat liver by affinity chromatography.Biochem Biophys Res Commun.1970；38：1064-8；Garcia MA，Klebe RJ.Affinity chromatography of RNaseInhibitor.Mol Biol Rep.1997；24：231-3；Chatterjee J，Maiti TK，Dasgupta S.Isolationand partial characterization of ribonuclease inhibitor from goat liver.Protein PeptLett.2006；13：779-83)。对牛、猪、羊、小鼠和大鼠来源的RI研究(Burton LE，FucciNP.Ribonuclease inhibitors from the livers of five mammalian species.Int J PeptProtein Res.1982；19：372-9)显示，它们具有与人胎盘来源的RI相近的性质和氨基酸组成。

随着基因工程技术的发展，通过基因重组表达人、大鼠和猪RI，也在大肠杆菌和其它表达宿主获得了成功(美国专利5,552,302；美国专利5,965,399；美国专利5,932,440；Klink TA，Vicentini AM，Hofsteenge J，Raines RT.High-levelsoluble production and characterization of porcine ribonuclease inhibitor.ProteinExpr Purif.2001；22：174-9；Park JH，Hwang IS，Kim KI，Lee JM，Park YM，Park CH，Chung IS.Functional expression of recombinant human ribonuclease/angiogenininhibitor in stably transformed Drosophila melanogaster S2 cells.Cytotechnology.2008；57：93-9)。