[发明专利]一种离体组织稳定保护剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种保护液，可用于储存和保护新鲜样本，尤其指临床手术后的组织样本。 其可以保护组织样本中的RNA在常温下不被降解，从而可以用于随后的实验室研究或临 床试验。

背景技术

关于人类疾病的研究具有特殊性，因为研究人类自身与其他动物不同的是，对于其他 动物，我们可以根据自己的需要，构建动物模型，比如小鼠，通过环境诱导使其得病，然 后再用药物治疗，在各个实验过程中可以设置正常小鼠参照，最后处死小鼠，取出组织， 以供我们做分子水平、细胞水平以及活体水平的各种科研实践。然而这对于人类就不可能 通过这种手段进行科研实践。虽然人类与小鼠的基因组有着90％以上的相似性，但还是存 在很大的差异，并且由于人的社会活动性，所处的环境不同，也造成了人与人之间的差异。

因此，我们要研究人类自身的疾变，最多的是依赖于已患疾病的病人组织、血液、体 液等样本，通过基因芯片诊断、细胞生物学分析、组织切片、蛋白分离纯化等生物学技术， 并结合病人的个人信息，包括社会活动和环境接触，来推算出该疾病患病的原因。这就非 常依赖于现有疾病样本的收集和研究。而对于组织样本的研究，一般是根据组织中的RNA 来研究基因表达差异；或者通过组织中的DNA来研究基因组差异，比如测序研究单核苷 酸多态性，基因突变等；或者通过组织中的蛋白差异来研究一些特异性的标记物，从而筛 选并发现一些能用于早期诊断的分子标记物。

然而，RNA一旦组织离体后，就很容易降解；质量差的组织，对于后续的科研工作的 重要性就会大大降低，甚至毫无作用，或者起误导作用。由于环境中充满了各种RNA酶， 从新鲜组织中提取RNA时，样品若不能马上处理，则通常需要立即保存于液氮，而液氮 和超低温冰箱并不能普及到每个实验室或者医院，并且液氮和超低温冰箱的维护也需要较 高的费用。液氮虽然解决了保存问题，但仍然无法有效的解决样品的运输问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种离体组织稳定保护剂及其制备方法，本发明的离 体组织稳定保护剂能在常温下保护离体组织的RNA不被降解。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种离体组织稳定保护剂的制备方法，包括以下 步骤：

1)、配制pH为7.8～8.2的Tris-EDTA；

2)、配制摩尔浓度为3.8～4.2mol/L的(NH4)₂SO4溶液；

3)、在680～720ml步骤2)所得的(NH4)₂SO4溶液中加入步骤1)所得的Tris-EDTA 180～220ml，然后于搅拌状态下滴加0.08～0.12M的NaOH溶液，直至pH为8.1～8.2；再用18.2M 欧姆的去离子水定容至1000ml；得离体组织稳定保护剂。

作为本发明的离体组织稳定保护剂的制备方法的改进：Tris-EDTA和(NH4)₂SO4溶液 中均以18.2M欧姆的去离子水作为溶剂。

本发明的离体组织稳定保护剂制备方法的最佳技术方案如下：

1)、配制pH为8.0的Tris-EDTA；

2)、配制摩尔浓度为4mol/L的(NH4)₂SO4溶液；

3)、在700ml步骤2)所得的(NH4)₂SO4溶液中加入步骤1)所得的Tris-EDTA 200ml， 然后于搅拌状态下滴加0.1M的NaOH溶液，直至pH为8.15；再用18.2M欧姆的去离子水定 容至1000ml；得离体组织稳定保护剂。

上述pH为8.0的Tris-EDTA的制备方法如下：

将0.5～1mol的Tris和0.002～0.01mol的EDTA溶解于800ml的18.2M欧姆的去离子水， 利用0.1M的HCl溶液调节pH为8.0；然后用18.2M欧姆的去离子水定容至1000ml；得 pH为8.0的Tris-EDTA。

在本发明中，NaOH溶液和HCl溶液均以18.2M欧姆的去离子水作为溶剂。

本发明还同时提供了利用上述方法制备而得的离体组织稳定保护剂。