[发明专利]一种产β-D-半乳糖苷酶的菌株及用该酶生产低聚半乳糖的方法

权利要求书

1.一株产β-D-半乳糖苷酶的菌株，其分类命名为克鲁维酵母(Kluyveromycessphaeroides)SK16.001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M 2010073。

2.用权利要求1所述的CCTCC NO：M 2010073菌株发酵生产β-D-半乳糖苷酶的方法，其特征在于步骤为：

(1)种子培养

种子培养基：酵母膏1-10g/L，蛋白胨1-20g/L，葡萄糖1-40g/L，pH5.5-8.0，去离子水配制；

种子培养条件：菌株于28-30℃、100-250rpm的振荡速度下在种子培养基中培养10-20h活化该菌株；

(2)发酵培养

发酵培养基：酵母膏1-20g/L，蛋白胨1-20g/L，乳糖1-30g/L，pH5.5-8.0；

发酵条件：25-30℃、搅拌速度400-700rpm、空气流量0.5-1.0vvm的条件下在发酵培养基中发酵10-48h生产β-D-半乳糖苷酶；

(3)发酵后处理

发酵液经冷冻离心后收集湿菌体，用pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液制成菌悬液，然后菌体细胞破壁提取出β-D-半乳糖苷酶；冷冻离心后，收集的上清液即为粗酶液，经检测酶活达到2-100U/mL；

所得粗酶液进一步超滤浓缩，或用硫酸铵沉淀蛋白质，离心和冷冻干燥得到β-D-半乳糖苷酶的粗酶粉。

3.用权利要求2所述方法制备的β-D-半乳糖苷酶转化乳糖生产低聚半乳糖的方法，其特征在于：

向底物乳糖溶液中添加β-D-半乳糖苷酶进行催化转化生产低聚半乳糖，转化条件为：乳糖溶液的乳糖质量浓度为20％-80％，酶对底物用量为0.1-30U/g乳糖干基计，pH4.0-8.0，转化反应温度为30-50℃，转化反应时间3-36h，转化率达30％以上，得到含有低聚半乳糖的酶反应液，进一步加工处理用来制备低聚半乳糖糖浆或低聚半乳糖粉末。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于低聚半乳糖糖浆的制备方法，步骤为：

(1)脱色

在含有低聚半乳糖的酶反应液中添加酶反应液固形物质量含量0.2％-2.0％的活性炭，在50-80℃下温育10-60min，然后进行硅藻土过滤，取脱色液；

(2)浓缩

将脱色液真空蒸发浓缩至固形物质量含量为20％-70％，即得低聚半乳糖糖浆。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于低聚半乳糖粉末的制备方法，步骤为：

(1)脱色

同权利要求4所述脱色步骤；

(2)浓缩

将脱色液真空蒸发浓缩至固形物质量含量为20％-40％的浓缩液；

(3)喷雾干燥

将麦芽糊精与低聚半乳糖浓缩液以固形物含量干基计，按照质量比1∶1-1∶5的比例混合，控制进风温度170-180℃、出风温度70-80℃，喷雾干燥，得到含麦芽糊精的低聚半乳糖粉末。