[发明专利]一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺

权利要求书

1.一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，包括以下步骤：（1）发酵液预处理：发酵结束后放罐前，加入3～5 mol/L的氢氧化钠溶液，调节发酵液pH=8.0～11.0，然后将发酵液加热升温至60～80℃，保温并以300-800r/min速度搅拌处理30～60 min；（2）浸泡提取：预处理后的发酵液冷却至室温后，按发酵液与极性有机溶剂体积比=1:0.5～2加入高介电常数极性有机溶剂，在10～40℃条件下浸泡、搅拌提取4～20小时，得到多杀菌素浸提液；多杀菌素浸提液用固液分离技术处理，弃去菌体固形物沉淀，收集浸提清液；（3）将浸提清液转入旋转蒸发仪或真空浓缩罐中，在40～50℃条件下，通过真空浓缩，将发酵液中的高介电常数极性溶剂挥发除去，得到多杀菌素浓缩液；（4）在多杀菌素浓缩液中加入低介电常数或高碳醇类萃取溶媒进行萃取，萃取条件为：萃取溶媒与多杀菌素浓缩液体积比=1:1～5，温度20～45℃，pH=7.0～11.0，萃取时间3～10min；萃取完成分层后，收集负载有机相；（5）向负载有机相中加入酸水进行反萃取，反萃取条件为：负载有机相与酸水体积比=1～5:1，酸水浓度0.1～0.4 mol/L，温度10～30℃，反萃取时间1～5 min，反萃取级数为1～5；反萃取分层完成后收集反萃取相；（6）用真空浓缩法或吹气法除去反萃取相中残留的萃取溶媒，用 NaOH溶液调节pH值=8.5～11.5，使多杀菌素以结晶形式沉淀出来，过滤，用pH=9.0～11.0的稀碱溶液将多杀菌素沉淀洗涤1～3次，真空干燥，即得到多杀菌素粉剂。

2.根据权利要求1所述的从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，所述第（2）步，所述高介电常数极性溶剂是选自甲醇、丙酮、乙醇、乙腈中的一种或二种以上。

3.根据权利要求1或2所述的从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，所述第（4）步，所述低介电常数萃取溶媒是选自乙酸丁酯、乙酸乙酯、乙酸戊酯、正己烷、石油醚、甲苯、二甲苯中的一种；所述高碳醇萃取溶媒是选自正辛醇、异辛醇、仲辛醇中的一种。

4.根据权利要求1或2所述的从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，所述第（5）步，所述反萃取用酸水是选自酒石酸、草酸、柠檬酸、苹果酸、盐酸的水溶液中的一种。

5.根据权利要求3所述的从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，所述第（5）步，所述反萃取用酸水是选自酒石酸、草酸、柠檬酸、苹果酸、盐酸的水溶液中的一种。

6.根据权利要求1或2所述的从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，所述第（2）步，发酵液与极性有机溶剂体积比=1:1.5，浸泡温度为20～30℃，搅拌时间10～15小时。

7.根据权利要求1或2所述的从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，所述第（4）步，萃取溶媒与多杀菌素浓缩液体积比=1:2.5，萃取温度30℃，萃取pH=10.0，萃取时间8 min。

8.根据权利要求1或2所述的从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，所述第（5）步，负载有机相与酸水体积比=1:2.5，酸水浓度0.15 mol/L，温度18℃，反萃取时间2 min。

9.根据权利要求3所述的从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，所述第（5）步，负载有机相与酸水体积比=1:2.5，酸水浓度0.15 mol/L，温度18℃，反萃取时间2 min。

10.根据权利要求1或2所述的从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺，其特征在于，所述第（6）步，用 NaOH溶液调节pH值=10.0。