[发明专利]一种快速检测细胞内火鸡疱疹病毒的方法有效
| 申请号： | 201010157599.1 | 申请日： | 2010-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN101812542A | 公开（公告）日： | 2010-08-25 |
| 发明（设计）人： | 揭鸿英;侯继波;何家惠;唐应华;吴培培;于漾 | 申请（专利权）人： | 国家兽用生物制品工程技术研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人： | 王荷英 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 细胞内 火鸡 疱疹病毒 方法 | ||
1.一种快速检测细胞内火鸡疱疹病毒的方法，包括如下步骤：
(1)样品处理：用胰酶消化待检测的感染HVT-FCl26的鸡胚成纤维细胞， 离心后取沉淀，用缓冲液悬浮该沉淀，即得到样品DNA；
(2)PCR扩增反应：以样品DNA作为模板，以HVT_F、HVT_R为引物，进行 PCR扩增反应，获得PCR扩增产物；
所述HVT_F的序列为5′-TTCGACATTCATGATGTTCTGGTG-3′，
所述HVT_R的序列为5′-TGCGCTCGAAGAGTTACCGATC-3′；
所述PCR扩增反应体系为：样品DNA、2.5μL的10×PCR缓冲液、2μL浓 度为25mM的MgCl2、0.5μL浓度为10mM的dNTPs、1.5μL浓度为10μmol/L的 HVT_F、1.5μL浓度为10μmol/L的HVT_R、0.5μL浓度为5U/μL的TaqDNA聚 合酶、14.5μL的ddH2O；所述PCR扩增反应程序为94℃预变性10min；94℃变 性45sec、54-57℃退火45sec、72℃延伸1min，35次循环；最后72℃延伸10min， 获得PCR扩增产物；
(3)电泳检测及结果分析：取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，若PCR电泳图 谱中，对应于样品DNA的泳道在666bp处有特异性扩增条带，则该样品感染了火 鸡疱疹病毒。
2.根据权利要求1所述的快速检测细胞内火鸡疱疹病毒的方法，其特征在 于所述的退火温度为55℃。
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