[发明专利]用于检测非洲猪瘟病毒抗体的竞争ELISA试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明为检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测试剂盒，属于生物技术领域。具体而言，本发明涉及一种动物检疫中检测抗体的ELISA试剂盒及其用途。 

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触的烈性传染性疾病。其特征为病程短、病死率高率，可高达100％，临床症状和病理变化均类似于急性猪瘟，在诊断时极易误诊，表现高热、皮肤充血发绀、流产、水肿及脏器出血。(William，Hess Adv.African swine fever：a reassessment[J].Vet Sci Comp Med，1981，25：39～69)世界动物组织(OIE)列为A类疫病，我国规定为动物一类疾病，受到世界各国的高度重视(孙怀昌.中国预防兽医学报，1999，21(2)：117～119)。 

本病自1921年在肯尼亚发现以来，一直存在于撒哈拉以南的非洲国家，1957年先后流传至西欧和拉美国家，多数被及时扑灭，单在葡萄牙，西班牙西南部和意大利的撒丁岛仍有流行，截至目前已在非洲、欧洲和美洲等数十个国家流行，而且有不断蔓延趋势。2007年，亚美尼亚连续发生六起非洲猪瘟，我国尚无该病。 

非洲猪瘟在国际病毒分类委员会第四次报告中归于虹彩病毒科，在该委员会第五次报告中将其列在痘病毒科之下，置于该科的脊椎动物痘病毒亚科及昆虫痘病毒亚科之外。但DNA序列分析表明，ASF病毒具有介于痘病毒和虹彩病毒之间的特征，ASFV的这一特性表明它不属于国际病毒分类委员会所核定的任何一科，是个新科，1995年第9次国际病毒分类委员第六次报告，将非洲猪瘟病毒列入“类非洲猪瘟病毒属”，非洲猪瘟是唯一已知的代表种。 

非洲猪瘟病毒是一种大的、有囊膜的双链DNA病毒，是唯一的虫媒DNA病毒。其基因组为末端共价闭合的单分子线状双链DNA，病毒基因组全长为 170kb～190kb，中央有125kb左右的保守区，两端为可变区，含有末端反转重复序列，这些重复序列的增加或者缺失是造成不同分离株基因组长度差异的主要原因(Rafacl，Yancz，Javier M，et al.Analysis of the completeNucleotide Sequence of Afican Swine Fever Virus[J].Virology，1995，208：249～279)。ASF病毒基因组有5个编码基因，包括假定膜蛋白、分泌性蛋白、参与核甘酸和核酸代谢(DNA修复)以及蛋白修饰的酶，整个基因组含有151个ORF，可以编码150～200种蛋白质，已从ASFV感染的细胞中分离鉴定出86种病毒蛋白多肽(曲连东，于康震，非洲猪瘟研究进展，中国兽医科技，1998，28(11)：42～43)。 

非洲猪瘟病毒大多数毒株的毒力都很强，但是免疫原性很低，只有少数几个蛋白具有免疫原性。实验证明，P30蛋白为具有较好抗原性的蛋白之一，蛋白分子量约为36KD。 

发明内容

本发明的目的是以原核表达的重组蛋白为基础，通过酶联免疫技术研制一种检测非洲猪瘟病毒抗体的竞争ELISA试剂盒。 

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于检测非洲猪瘟病毒抗体的竞争ELISA试剂盒，所述的试剂盒包括由保藏号为CGMCC NO.3771杂交瘤细胞系分泌的抗非洲猪瘟病毒单克隆抗体的酶标记物。 

还包括ELISA板条、血清稀释液和浓缩洗涤液、底物显色液、终止液、阳性对照、阴性对照。 

上述用于检测非洲猪瘟病毒抗体的竞争ELISA试剂盒包括： 

所述ELISA板条：每个试剂盒装有2块或5块ELISA微孔板，每块ELISA板条为能自行拆卸的已包被抗原的ELISA微孔板，包被抗原为原核表达的P30蛋白，规格为8孔×12条； 

所述血清稀释液和浓缩洗涤液：血清稀释液为即用型，洗涤液为25倍浓缩，使用前稀释； 

所述底物显色液：即用型TMB显色液，50mL； 

所述终止液：2mol/L的H₂SO₄溶液，50mL； 

所述酶标单克隆抗体：所述辣根过氧化物酶标记的鼠抗P30单克隆抗 体，使用前100倍稀释； 

阳性对照； 

阴性对照。 

所述的竞争ELISA试剂盒在检测非洲猪瘟病毒中的应用。