[发明专利]SPIO@SiO2-WGA肠壁靶向造影剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种超顺磁性四氧化三铁(SPIO：superparamagnetic iron oxide)磁共振纳米造影剂的制备方法，特别涉及一种SPIO@SiO2-WGA肠壁靶向造影剂的制备方法。

背景技术

磁共振成像技术在肿瘤疾病的诊断中有着非常重要的作用，广泛应用于临床检测。其成像效果很大一方面取决于其使用的造影剂，好的造影剂或具有特异靶向的造影剂能提高诊断信号对比度，从而更早地发现肿瘤。而按目前的医疗水平，早期癌症病人约有80％～90％以上可以治愈。因此，开发性能优异的磁共振造影剂，从而提早发现肿瘤，是恶性治疗肿瘤的关键。

随着造影剂制备理论和技术、材料临床基础研究以及磁共振成像的不断发展和完善和发展，部分磁共振造影剂在临床上获得较广泛应用，且发展迅猛。用于疾病诊断的磁共振造影剂材料主要包括以下几类：(1)阳性造影剂：常规诊断剂量的顺磁性造影剂如常规剂量的含钆造影剂，使病灶组织的信号增强，如Gd-DTPA、Gd-DTPA-BMA等。(2)阴性造影剂：是病灶组织的信号减弱，超顺磁性四氧化三铁造影剂就属于此类，如Feridex(菲立磁)、Resovist等。超顺磁性造影剂相比含钆造影剂具有组织特异性高、更安全的特点，已成为近年来磁共振造影剂的研究热点。

肠壁的损伤是很多肠道疾病如肠炎肠癌的诊断依据之一，但目前临床上的磁共振造影剂对粘膜损伤成像效果差，很难在肠粘膜局部损失的情况下实现清晰的造影成像。麦胚凝集素(Wheat germ agglutinin，WGA)是从谷物中提取出来的、能与糖结合的蛋白质，在细胞识别和粘着反应中起重要作用，主要是促进细胞间的粘着。麦胚凝集素凝集素具有一个以上同糖结合的位点，因此能够参与细胞的识别和粘着，将细胞及与WGA修饰的药物相联接。采用WGA修饰经SiO2包裹的超顺磁性四氧化三铁，实现肠粘膜细胞与阴性造影剂的连接，对提高肠道疾病如肠炎肠癌的诊断精度具有重要的意义。

对专利文献调研发现，目前已有不少关于超顺磁性氧化铁的专利，如专利《采用超顺磁性硅壳纳米颗粒静电吸附分离蛋白质的方法》(公开号：CN1876673)制备了二氧化硅包裹的Fe3O4球及表面氨基化的二氧化硅包裹的Fe₃O₄球，表面分别带正电和负电，前者可实现对目标碱性蛋白质(细胞色素C)的分离提取，后者可实现对目标酸性蛋白质(牛血清白蛋白)的分离提取。专利《一种两亲超顺磁性磁共振造影剂及其制备方法》(公开号：CN101518656)制备了一种多元醇分子包覆的MnFe₂O₄纳米粒子。专利《氨基硅烷偶联剂与葡聚糖共修饰的超顺磁性纳米颗粒及其制备方法》(公开号：CN101554574)公开了一种氨基硅烷偶联剂与葡聚糖共修饰的超顺磁性纳米颗粒及其制备方法，该超顺磁性纳米颗粒具有核壳型结构，其内核为磁性四氧化三铁，内核表面为葡聚糖包覆层，葡聚糖包覆层外表面连接氨基硅烷偶联剂。总结目前已有的专利，但大多数专利仅涉及到超顺磁性粒子的制备、二氧化硅包裹及表面氨基化和聚合物表面修饰，很少有专利涉及到超顺磁性氧化铁表面包裹蛋白质实现功能化。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的磁共振造影剂对肠壁的吸附性不好、成像效果不佳等不足，提供一种WGA包裹的SPIO@SiO2磁共振纳米造影剂的制备方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种SPIO@SiO2-WGA肠壁靶向造影剂的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.超顺磁性四氧化三铁水溶性转化：配置质量百分比浓度为3～4％的十六烷基三甲基溴化胺水溶液；搅拌下，将超顺磁性四氧化三铁氯仿溶液加入到上述的十六烷基三甲基溴化胺溶液中，搅拌均匀后去除氯仿，得到SPIO@CTAB溶液；其中十六烷基三甲基溴化胺的质量和铁元素质量比例为：30∶1～40∶1；

b.CTAB包裹超顺磁性四氧化三铁的表面氨基化：将步骤a所得SPIO@CTAB溶液用去离子水稀释10～13倍后，加入氨水使反应在pH为9～14的条件下进行，搅拌下加热至40-70℃，将正硅酸乙酯缓慢加入到上述反应液中，加入速度为1ml/h～2ml/h，搅拌反应1小时后，再缓慢加入氨丙基三乙氧基硅，搅拌反应4小时后停止；调节反应液的pH为5～7，在13000r/min的转速下离心10min，沉淀用pH＝6.0的磷酸盐缓冲溶液离心洗涤，最后得到SPIO@SiO₂的磷酸盐缓冲溶液；其中正硅酸乙酯、氨丙基三乙氧基硅和溶液中铁元素的质量比为：96∶25∶1；