[发明专利]检测人乳头瘤病毒的基因芯片及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别是一种含有人乳头瘤病毒(HPV) 各亚型探针的基因芯片，本发明还涉及一种用于HPV检测及分型的试剂盒。

背景技术

全球每年约有51万名妇女被诊断为宫颈癌，其是仅次于乳腺癌的人类第二 大妇科恶性肿瘤，并且其发病现在呈年轻化趋势。在国内，每年新增宫颈癌病例 约13.5万，占全球发病数量的1/3，约有8万人因此病死亡。研究发现90％以上 的宫颈癌患者伴有人乳头瘤病毒(human papillomaviruses，HPV)感染。宫颈癌 及其癌前病变的发生是多种因素协同作用的结果，高危型HPV感染时宫颈癌演 变的始动因素，而HPV与宿主染色体的整合则是推动宫颈癌变进展的重要事件。 因此检测宫颈病变中HPV感染及整合情况，有利于早期发现、早期诊断宫颈癌及 癌前病变；及时治疗控制HPV感染，可预防宫颈内瘤变发生，能有效降低宫颈 癌的发病率和死亡率，对宫颈癌的防治有极大的临床价值。

HPV是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒，属双链闭环的小DNA病毒。人 类是HPV的唯一宿主，它定向感染人体皮肤及粘膜的复层鳞状上皮内，具有高 度的宿主特异亲和力。

国际癌症研究中心(IARC)专题讨论会(1995年)明确提出，HPV感染是宫颈 癌的主要病因。目前鉴定出HPV亚型100余种，其中30余种与宫颈感染和病变 有关，根据其致病力的大小分为高危型和低危型两种：将HPV6、11、40、42等 归为低危型，主要引起生殖道、肛周皮肤和阴道下部的外生殖性湿疣类病变、扁 平湿疣类病变和低度子宫颈上皮内瘤变(CIN I)；高危型主要为HPV16、18、31、 33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82等，主要导致高度子宫颈 上皮内瘤变(CIN II、CIN III)和宫颈癌的发生，尤其是HPV16和18型。因此， 检测出样本中的具体HPV亚型对于宫颈癌的防治具有重要的指导意义。

HPV病毒无法在体外培养，在体内也不能被诱导出易于检测的免疫反应， 因此无法采用血清学检测的方法对其进行诊断和分型。早期HPV的诊断主要是 根据典型的临床表现和肉眼可见的尖锐湿疣；或是根据细胞学或病理学特征性改 变来判断，包括巴氏涂片(Pap Smear)和液基薄层细胞检测(TCT)，但常会出 现一种未确定意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)，常可掩盖一部分有意义的 组织病理学异常而出现假阴性结果，需结合分子生物学技术进行确诊。

近年来各种分子生物学技术广泛应用为检测病毒基因组的诊断技术，其中普 通及荧光PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，但是由于其高灵敏度， 容易因非特异性扩增而出现假阳性，并且由于检测通量的局限性不能满足临床的 需要。HC2则是目前唯一获得美国FDA批准的，可以应用于临床的诊断方法。 但该方法只能检测出样本中是否有HPV的感染，不能鉴定出具体的HPV病毒亚 型，不利于临床跟踪检查和治疗。

高危型HPV DNA整合到宿主基因组将导致宿主细胞产生包括抑癌基因功能 缺陷、激活癌基因、基因组不稳定性和细胞永生化等一系列不可逆的链式反应， 是宫颈癌变的重要机制之一，其警示价值高于目前的一般HPV-DNA感染检测， 但目前市售的试剂盒所采用的探针均缺少针对HPV整合情况的检测，此外目前 已有的HPV检测膜条并未明确分区检测HPV，对于普通临床医生容易误诊，本 发明针对以上2种对临床有重要意义的指标进行了检测和改进，使得临床HPV 感染的检测更丰富，更精确，更实用，更有价值。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明提供了一种可用于检测27种HPV亚 型与人染色体整合状态的基因芯片：

一种检测人乳头瘤病毒的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的 人乳头瘤病毒检测探针，其特征在于，所述检测探针包括SEQ ID No.9-37的核 苷酸序列：

HPV6：5’-AACTACATCTTCCACATACAC-3’(SEQ ID No.9)

HPV11：5’-GTCTAAATCTGCTACATACAC-3’(SEQ ID No.10)

HPV16：5’-ATTATGTGCTGCCATATCTACTT-3’(SEQ ID No.11)

HPV18：5’-ACAGTCTCCTGTACCTGGG-3’(SEQ ID No.12)