[发明专利]一种革兰氏阳性菌DNA疫苗及其构建和应用有效
| 申请号： | 201010151852.2 | 申请日： | 2010-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN101837133A | 公开（公告）日： | 2010-09-22 |
| 发明（设计）人： | 孙黎;孙云 | 申请（专利权）人： | 中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | A61K48/00 | 分类号： | A61K48/00;A61K39/09;A61P31/04;C12N15/31;C12N15/74 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 许宗富;周秀梅 |
| 地址： | 266071*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 革兰氏 阳性 dna 疫苗 及其 构建 应用 | ||
1.一种革兰氏阳性菌DNA疫苗，其特征在于：疫苗序列表由SEQ IDNo.1中的碱基序列所示。
2.一种按权利要求1所述的革兰氏阳性菌DNA疫苗的构建，其特征在于：
以海豚链球菌G26为模板，用引物F4和R2进行PCR扩增，扩增产物与载体pBS-T连接，将连接产物转化到大肠杆菌DH5α而后在含有100ug/ml安卡青霉素(Ap)、40ug/ml 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-乳糖苷(Xgal)和24ug/ml异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的LB固体培养基上培养，挑出白色转化子，提取质粒；所得质粒用SmaI酶切，回收0.5kb片段，同时将质粒pCN3用SmaI酶切回收5.5kb片段，将上述回收的两片段用T4DNA连接酶于室温连接2-4小时，连接液转化到大肠杆菌DH5α后在含有Ap(100ug/ml)的LB固体培养基上培养24小时，挑取转化子，提取质粒，即为含有序列表SEQ ID No.1中的碱基序列的DNA疫苗质粒pCNS10；
所述引物F4为5’-CCCGGGCCACCATGGCAGAATTTAATCAATCAAA-3’；R2为5’-CTCGAGCCCGGGGATATGAATATAATTATATGAGCT-3’。
3.一种按按权利要求1所述的革兰氏阳性菌DNA疫苗的应用，其特征在于：所述DNA疫苗对海豚链球菌具有免疫保护作用。
4.按权利要求3所述的革兰氏阳性菌DNA疫苗的应用，其特征在于：所述DNA疫苗使牙鲆对海豚链球菌具有免疫保护作用。
5.按权利要求3所述的革兰氏阳性菌DNA疫苗的应用，其特征在于：所述将DNA疫苗质粒溶于PBS至浓度为200ug/ml，DNA疫苗悬液以100-120ul的剂量对鱼类进行肌肉注射。
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