[发明专利]磷脂爬行酶1在制备抗乙型肝炎病毒感染药物中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物化学物质在制药工程中的新用途，更具体地说就是磷脂爬行酶1 (phospholipid scramblase 1，PLSCR1)在制备治疗和预防乙型肝炎病毒(HBV)感染相关性疾 病的药物中的应用。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)感染严重威胁人类的健康，是导致肝炎、肝硬化、肝癌的重要原因。 全世界有3.5亿乙型肝炎病毒携带者，中国约有1.2亿HBV携带者，其中2000多万人为慢 性乙肝患者。每年我国在慢性病毒性肝炎方面的直接治疗费用超过500亿人民币。HBV感染 不仅给患者及其家庭造成巨大的经济和精神负担，而且给国家造成了巨大的劳动力和经济损 失，乃至导致严重的就业等社会问题。然而目前仍然缺乏特别有效的治疗药物，疫苗虽然可 起到一定的预防作用，但对已感染者及免疫耐受者无效。临床应用的抗HBV药物主要有干扰 素以及一些核苷类似物。干扰素的痊愈率有限，停用后通常会出现复发现象。核苷类似物如 拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等是HBV DNA聚合酶的强抑制剂，能有效阻断病毒复制， 但长期用药会导致病毒变异，产生耐药性，而且部分病人停药后会复发。因此，新型抗HBV 药物的研制具有重大的社会和经济效益。

磷脂爬行酶1(phospholipid scramblase 1，PLSCR1)属于Ca²⁺结合的棕榈酰化II型膜蛋白， 非棕榈酰化的PLSCR1蛋白可定位于细胞核内，并与基因组DNA序列结合。最初的研究显 示，PLSCR1参与细胞膜磷脂跨膜活动。随后的研究发现多种细胞因子如干扰素、表皮生长因 子等能够调节PLSCR1的表达，而且发现，PLSCR1蛋白可与多种蛋白如c-Ab1、EGFR、c-Src、 PKCδ和onzin等相互作用，提示PLSCR1在细胞信号传递中的作用。有关磷脂爬行酶1抗乙型 肝炎病毒的作用尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种磷脂爬行酶1用于治疗HBV感染相关疾病中的新用途。具体 说，本发明涉及磷脂爬行酶1在制备治疗或预防HBV感染引起的相关疾病的药物中的应用。

人磷脂爬行酶1是天然存在于细胞内的一种蛋白，分子量约为37000道尔顿，它是有318 个氨基酸残基组成的一条单肽链。一级结构参考NCBI公布的蛋白序列，序列号为 NP_066928.1。

本发明提供一种磷脂爬行酶1的医药新用途：以磷脂爬行酶1为活性成分，配以制药可 接受的载体，制成多种制剂，用以治疗和预防HBV感染及其相关疾病。

所说的制药可接受的载体包括药用稀释剂、稳定剂、赋形剂、吸收促进剂、促渗透剂、 蛋白酶抑制剂、阻聚剂等，如甘氨酸、PH7.0磷酸盐缓冲液、右旋糖酐、乳糖、氯化钠、柠 檬酸、明胶、注射用水、生理盐水、脂质体、胆盐、脂肪酸、皂角苷、辛酸钠、月桂酸钠、 聚丙烯酸、梭链孢酸衍生物(如牛磺酸二氢梭链孢酸盐、环糊精等)、甘油、A-zone、表面 活性剂、脂肪酸、胆盐、水杨酸钠、Zonula occludens toxin(ZOT)、甘胆酸钠、camostat mesilate、bacitracin、aprotinin、大豆胰酶抑制剂、非离子表面活性剂、糖、甘露醇、山 梨醇、PEG、人血清白蛋白等，可同时使用其中的一种或多种。

本发明药物可制作适合于静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔给药、肺部给药、口服 给药以及透皮给药用剂型，包括溶液型注射剂、冻干粉针、微球、粉末、粉雾剂、气雾剂、 肠溶衣、毫微球、微乳、复乳等剂型。

根据本发明，细胞内高表达PLSCR1或者在细胞培养液中加入体外重组表达获得的PLSCR1 蛋白或其突变体蛋白均可特异性抑制乙肝病毒的复制和表达，PLSCR1可能成为治疗及预防 HBV感染相关疾病的新型生物工程药物。

根据本发明，将含有PLSCR1表达序列标签(CDS)序列的载体转染入HBV1.3瞬时转染HepG2 细胞模型以及HepG2.2.15细胞模型，能够特异性抑制乙肝病毒的复制和表达，因此含有 PLSCR1 CDS序列的载体可能成为制备治疗及预防HBV感染相关疾病的生物工程药物。

根据本发明，为增强PLSCR1的抗HBV活性，降低PLSCR1的毒性，本发明包含了突变其 中部分氨基酸或者增加其它氨基酸序列的PLSCR1蛋白的各种变异体。