[发明专利]从曼地亚红豆杉枝叶中同时提取紫杉醇和10-DABⅢ的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从植物枝叶中分离提取天然有机化合物的方法，具体地说是一种从曼地亚红豆杉枝叶中同时提取紫杉醇和10-DAB III的方法。

背景技术

紫杉醇和10-DAB III(10-去乙酰基巴卡亭III)均是从红豆杉中分离出的天然有机化合物。紫杉醇是一种四环二萜的化合物，是一种治疗进行性卵巢癌、乳腺癌、白血病及其它癌症的天然药物，同时也是唯一促进微管蛋白凝聚并不可逆解聚的天然新型抗肿瘤特效药。10-DAB III是紫杉醇的前体物。我国自1984年起就开始了红豆杉和紫杉醇制备的研究工作，最早是从西藏的喜马拉雅密叶红豆杉中提取得到紫杉醇，并得到抗癌活性与紫杉醇相当的新生物碱三类杉宁碱，此外还有10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基三尖杉宁碱、1q-羟基巴卡丁III和1B-羟基巴卡I III等，均有抗癌活性。但是在红豆杉中分离得到的许多紫杉烷类二萜类化合物和生物碱中，活性最强的是紫杉醇。但是，该化合物在红豆杉植物中含量极低，大约在0.001％-0.076％之间，并且提取困难。长期以来较为常用的从紫杉属植物中提取制备紫杉醇方法，其工艺路线一般为：浸出(或超声波或微波提取)——脱脂——萃取得到粗提物——2-3次工业色谱分离——结晶——溴化——正相色谱分离——重结晶得到产品，并在此基础上发展了许多改进工 艺。但是，这些现有工艺均存在一个缺陷，即一次提取只能得到一个产品，如得到紫杉醇或者得到10-DAB III后，通过半合成的方法得到紫杉醇。

发明内容

本发明的目的：发明一种简单、快速、准确地从曼地亚红豆杉枝叶中同时提取紫杉醇和10-DAB III的方法。

本发明的目的可通过以下技术方案来实现：

(1)将曼地亚红豆杉枝叶50℃烘干干燥后，粉碎成80目——120目的粉末，每5克干粉用80mL-120mL毫升甲醇进行提取，重复三次，过滤，合并3次的甲醇提取液；

(2)将甲醇提取液减压浓缩，用正己烷萃取除杂后，再用二氯甲烷萃取，最后合并二氯甲烷萃取液，二氯甲烷部分就是含有紫杉醇和10-DAB III的溶液；

(3)将二氯甲烷萃取液减压浓缩后，用色谱级的甲醇定溶，并进行HPLC含量测定。

本发明利用曼地亚红豆杉的枝叶资源，既提取紫杉醇，又提取10-DABIII，提高了提取速度，而且也提高了提取效果，方法简单可靠。

具体实施方式

下面结合实施例，对发明作进一步描述。

试验所用材料：曼地亚红豆杉的枝叶，50℃烘干样品，粉碎成100目的粉末。

试验用试剂：分析纯甲醇、正己烷，二氯甲烷，(天津市永大化学试剂开发中心)，色谱纯甲醇和乙腈，水为超纯水。

试验用仪器：KS-600E I型超声波清洗机由(宁波海曙科生超声设备有限公司)，Buchi R-210旋转蒸发仪，HPLC检测使用Waters 2487双波长检测器，Waters 515泵，7725I进样阀，HS 2000色谱数据处理软件，Milli-Q超纯水仪。HPLC色谱条件：symmetry C 18反相柱，250mm×4.6mm粒度5μm，柱温：30℃，流动相：甲醇∶水＝65∶35，乙腈∶水＝30∶70，流速：0.8mL·min^-1；柱温30℃；检测波长UV：227nm和234nm；进样体积：10μL。

实施例一

采集曼地亚红豆杉枝叶后，置于50℃烘箱内烘干，粉碎成100目的干粉，称取5g，加入100mL甲醇，超声处理40min，静置过滤，滤渣再以100mL的甲醇超声40min，如此重复3次，合并3次的甲醇提取液，在旋转蒸发仪中，50℃水浴，-0.09Mpa的真空下，减压回收甲醇至干。

HPLC检测甲醇提取液中的紫杉醇和10-DAB III的含量：减压回收甲醇至干后加入18mL的甲醇和2mL的水，用正己烷萃取色素等脂溶性杂质数次，弃去正己烷溶液后，甲醇液浓缩至干，再用二氯甲烷与水萃取数次，合并二氯甲烷萃取液，于旋转蒸发仪中40℃水浴，-0.03Mpa真空度，减压蒸干二氯甲烷。剩余物用色谱级甲醇溶解，定溶25mL，HPLC检测紫杉醇和10-DAB III的含量为0.177mg·g^-1和0.121mg·g^-1。

实施例二