[发明专利]玉米单倍体胚芽鞘节组织培养的方法及其专用培养基

权利要求书

1.一种分化培养基，是在MS基本培养液中添加如下物质得到的固体培养基：脯 氨酸、酪蛋白水解物、碳源和凝胶剂；

所述MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示；

所述分化培养基中脯氨酸的终浓度是0.6-0.8g/L、酪蛋白水解物的终浓度是 0.4-0.6g/L。

2.根据权利要求1所述的分化培养基，其特征在于：所述凝胶剂是琼脂粉、卡 拉胶或Gelrite，其中Gelrite在所述分化培养基中的终浓度是3.0g/L；所述碳源是 葡萄糖、麦芽糖或蔗糖，其中蔗糖在所述分化培养基中的终浓度是30g/L。

3.根据权利要求1或2所述的分化培养基，其特征在于：所述凝胶剂是Gelrite； 所述碳源是蔗糖。

4.根据权利要求3所述的分化培养基，其特征在于：所述分化培养基中脯氨酸 和酪蛋白水解物的终浓度分别是：脯氨酸为0.7g/L、酪蛋白水解物为0.5g/L。

5.一种生产玉米单倍体再生植株的方法，包括以下步骤：

1)将单倍体玉米籽粒的成熟胚置于MSVS34培养基中培养，萌发得到胚芽，选 取无色的单倍体胚芽；

所述单倍体玉米籽粒为以玉米单倍体诱导系Stock6作为父本，与农大108进行杂 交得到；

所述MSVS34培养基是在MS基本培养液中添加如下物质得到的培养基：酪蛋白 水解物、2-morpholinoethanesulfonic acid、氯化镁、谷氨酰胺、抗坏血酸、毒莠定、 benzyladenine、碳源和凝胶剂；其中酪蛋白水解物的终浓度是0.1g/L， 2-morpholinoethanesulfonic acid的终浓度是1.95g/L，氯化镁的终浓度是0.75g/L，谷氨 酰胺的终浓度是0.5g/L，抗坏血酸的终浓度是0.1g/L，毒莠定的终浓度是10mg/L， benzyladenine的终浓度是3mg/L，所述碳源为麦芽糖，所述凝胶剂为琼脂；所述麦芽 糖的终浓度是40g/L，所述琼脂的终浓度为8g/L；

2)将上述步骤1)中得到的单倍体胚芽切取胚芽鞘节接种于MSW57愈伤组织诱 导培养基中培养，得到单倍体愈伤组织；

所述培养是在25℃光照培养，光照强度2000lx，每天光照16h，光照培养21d；

所述MSW57愈伤组织诱导培养基是在MS基本培养液中添加盐酸硫胺素、酪蛋白 氨基酸、脯氨酸、硝酸银、2，4-D、毒莠定、碳源和凝胶剂得到的培养基；其中盐酸硫 胺素的终浓度为0.9mg/L，酪蛋白氨基酸的终浓度为0.5g/L，脯氨酸的终浓度为 1.38g/L，硝酸银的终浓度为3.4mg/L，2，4-D的终浓度为0.5mg/L，毒莠定的终浓度为 2.2mg/L；所述碳源为蔗糖，所述凝胶剂为琼脂；所述蔗糖的终浓度为30g/L，所述琼 脂的终浓度为8g/L；

3)将上述步骤2)中得到的单倍体愈伤组织置于权利要求1-4中任一所述的分化 培养基中培养，得到单倍体再生植株；

所述培养的条件是温度为25℃，放置在2000lx的光照强度下培养，每天光培养 16小时，暗培养8小时。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：在所述步骤2)和步骤3)之间还 包括继代培养，所述继代培养是将所述步骤2)中得到的单倍体愈伤组织置于N6继代 培养基中培养增殖，得到增殖的单倍体愈伤组织；

所述N6继代培养基是在N6基本培养液中添加酪蛋白水解物、脯氨酸、2，4-D、 碳源和凝胶剂得到的固体培养基；

所述N6基本培养液的溶剂是水、溶质如表2所示；

其中酪蛋白水解物、脯氨酸和2，4-D的终浓度分别是如下：酪蛋白水解物为0.5g/L， 脯氨酸为0.7g/L，2，4-D为1.5-2.5mg/L。