[发明专利]用αD珠蛋白基因作为鸡的高载氧能力的分子标记及其检测方法与应用

权利要求书

1.一种用α^D珠蛋白基因作为鸡的高载氧能力的分子标记，它的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，在所述的序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的第251bp处有1个A/C的碱基突变，记为A251C，导致BSEG I-RFLP多态性。

2.一种扩增权利要求1所述的用α^D珠蛋白基因作为鸡的高载氧能力的分子标记的引物对，所述引物对的DNA序列如下所示：

正向引物F：5′GCTGCCACCATGCTGACTGC 3′

反向引物R：5′AACCCCAAGATCCCCTGACCTGAG 3′。

3.一种制备权利要求1所述的用α^D珠蛋白基因作为鸡的高载氧能力的分子标记的方法，其特征是：

(1)从藏鸡和低地鸡样本的血液中提取鸡基因组DNA，用权利要求2所述的引物对在所提取的鸡基因组DNA中进行PCR扩增；

(2)PCR扩增片段大小为513bp，PCR产物经纯化回收和测序，将藏鸡和低地鸡的序列进行序列比对，获得藏鸡的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No：1所示，其中位于该片段251bp处存在A/C碱基突变，记为A251C，A251C突变引起了BSEG I酶切位点GGATGnn`多态；

(3)PCR产物经限制性内切酶BSEG I酶切并通过琼脂糖电泳进行基因型分型，当251bp处的碱基都为A时，BSEG I识别该位点，记为AA型220bp+258bp+35bp，当251bp处的碱基都为C时，BSEG I酶不能识别该位点，记为CC型478bp+35bp，杂合记为AC型478bp+220bp+258bp+35bp。

4.一种检测权利要求1所述的用α^D珠蛋白基因作为鸡的高载氧能力的分子标记的方法，其特征是：

(1)从待测鸡样本的鸡血液中提取鸡基因组DNA，用权利要求2所述的引物对在所提取的鸡基因组DNA中进行PCR扩增；

(2)取步骤(1)的PCR产物加入限制性内切酶BSEG I进行酶切，酶切片段经琼脂糖凝胶电泳分析，在凝胶成像系统观察并记录酶切分型结果；当251bp处的碱基都为A时，BSEG I识别该位点，记为AA型220bp+258bp+35bp，当251bp处的碱基都为C时，BSEG I酶不识别该位点，记为CC型478bp+35bp，杂合记为AC型478bp+220bp+258bp+35bp；

(3)检测结果判定：如果待测鸡个体基因型为CC型478bp+35bp，则该鸡个体具有α^D珠蛋白基因作为鸡的高载氧能力的分子标记，该鸡个体为具有高载氧能力的个体；基因型为AA型220bp+258bp+35bp，则该鸡个体为具有正常载氧能力的个体；基因型为AC型478bp+220bp+258bp+35bp，则该鸡个体为杂合个体。

5.权利要求1所述的用α^D珠蛋白基因作为鸡的高载氧能力的分子标记在藏优杂交鸡的标记辅助选择中的应用。